Diferența cheie – Pagina SDS vs Western Blot
Western blotting este o tehnică care detectează o anumită proteină dintr-o probă de proteine. Această tehnică este realizată prin mai mulți pași cheie: electroforeză pe gel, blotting și hibridizare. Electroforeza pe gel de poliacrilamidă cu dodecil sulfat de sodiu (pagina SDS) este un fel de tehnică de electroforeză pe gel care este utilizată pentru a separa proteinele în funcție de dimensiunile lor (greutăți moleculare). Western blot este o foaie specială a unei membrane de blotting care este utilizată pentru a transfera același model al proteinelor din pagina SDS. Diferența cheie dintre pagina SDS și western blot este că SDS Page permite separarea proteinelor într-un amestec, în timp ce western blot permite detectarea și cuantificarea unei proteine specifice dintr-un amestec. Ambele sunt utile în studiile de analiză a proteinelor.
Ce este pagina SDS?
SDS Page este o tehnică de electroforeză pe gel utilizată pentru separarea proteinelor. Este folosit în mod obișnuit în biochimie, genetică, criminalistică și biologie moleculară. Odată ce proteinele sunt extrase din probă, acestea sunt rulate pe un gel format din SDS și poliacrilamidă. SDS este un detergent anionic care este utilizat pentru a lineariza proteinele (denaturarea proteinelor) și pentru a conferi o sarcină negativă proteinelor linearizate proporțional cu masa lor moleculară. Poliacrilamida devine suportul solid pentru gel. Proteinele denaturate care sunt încărcate negativ migrează către capătul pozitiv al aparatului prin gel. În funcție de dimensiunile proteinelor, vitezele de migrare diferă între proteine și are loc separarea. Prin urmare, pagina SDS este utilă pentru separarea proteinelor individuale pe baza dimensiunilor acestora.
Pregătirea gelului de poliacrilamidă pentru fracţionarea proteinelor este un pas crucial în pagina SDS. Concentrația corectă de poliacrilamidă și tipul de agent de reticulare utilizat afectează puternic proprietățile fizice ale gelului, ceea ce face separarea efectivă a diferitelor proteine. Dimensiunile porilor gelului trebuie gestionate corespunzător pentru o separare eficientă. Cu toate acestea, pagina SDS este considerată o tehnică de separare a proteinelor de în altă rezoluție.
Tehnica SDS Page are o limitare majoră în analiza proteinelor. Deoarece SDS denaturează proteinele înainte de separare, nu permite detectarea activității enzimatice, a interacțiunilor de legare a proteinelor, a cofactorilor proteici etc.
Figura 01: Pagina SDS
Ce este Western Blot?
Tehnica Western blotting permite detectarea unei proteine specifice dintr-un amestec de proteine și măsurarea cantității și greutății moleculare a proteinei. Western blot este membrana utilizată în timpul procedurii de blotting pentru a obține imaginea în oglindă a modelelor proteice din gelul SDS-poliacrilamidă. Membrana care este utilizată pentru Western blotting este alcătuită în principal din nitroceluloză sau difluorură de poliviniliden (PVDF). Membrana cu proteina transferată poate fi utilizată pentru a identifica proteina dorită. Este nevoie de anticorpi de în altă calitate pentru detectarea proteinei dorite prin hibridizare. Anticorpul se leagă de antigenul său specific și dezvăluie prezența antigenului dorit, care este o proteină.
Transferul proteinelor din gelul de poliacrilamidă SDS la Western blot se realizează prin electroblotting. Este o metodă eficientă și rapidă care provoacă electroforeza proteinelor din gel și trecerea pe membrana de nitroceluloză (western blot).
Figura 02: Western Blot
Care este diferența dintre pagina SDS și Western Blot?
Pagină SDS vs Western Blot |
|
| SDS Pagina este o tehnică de electroforeză pe gel. | Western blot este o tehnică care se efectuează pe o membrană pentru a detecta o anumită proteină dintr-un amestec. |
| Utilizați | |
| Pagina SDS permite separarea proteinelor în funcție de mărimea acestora. | Western blot permite transferul de proteine pe gelul paginii SDS fără a-și schimba modelul și permite hibridizarea cu anticorpi specifici. |
| Dezavantaje | |
| Denaturarea proteinelor, costul ridicat și prezența substanțelor chimice neurotoxine sunt dezavantajele acestei tehnici. | Această tehnică necesită mult timp și necesită o bună experiență personală și condiții specifice controlate. |
Rezumat – Pagina SDS vs Western Blot
Pagina SDS și Western blot sunt două metode implicate în analiza proteinelor. Pagina SDS permite separarea ușoară a proteinelor pe un gel în funcție de greutatea lor moleculară. Western blot ajută la confirmarea prezenței și cantității unei proteine specifice prin hibridizare cu anticorpi specifici. Aceasta este diferența dintre pagina SDS și western blot.
