Diferența cheie – Electroforeza pe gel vs pagina SDS
Electroforeza pe gel este o tehnică care separă macromoleculele într-un câmp electric. Este o metodă comună în biologia moleculară de a separa ADN-ul, ARN-ul și proteinele din amestecuri în funcție de dimensiunile lor moleculare. Pagina SDS este un tip de electroforeză pe gel care este utilizat pentru a separa proteinele dintr-un amestec de proteine pe baza dimensiunilor lor. Electroforeza pe gel este un termen folosit pentru a se referi la tehnica normală aplicată pentru separarea ADN-ului, ARN-ului și proteinelor, în timp ce SDS Page este un singur tip de electroforeză pe gel. Aceasta este diferența cheie dintre electroforeza pe gel și pagina SDS.
Ce este electroforeza pe gel?
Electroforeza pe gel este o tehnică comună folosită în laboratoare pentru a separa moleculele încărcate precum ADN, ARN, proteine etc. din amestecurile lor. Un gel este utilizat în electroforeza pe gel. Acționează ca o sită moleculară. Există două tipuri de geluri utilizate în electroforeza pe gel și anume agaroză și poliacrilamidă. Selectarea unui gel și a preparatului de gel sunt factori importanți care trebuie luați în considerare în electroforeza pe gel, deoarece dimensiunea porilor gelului trebuie manipulată cu atenție pentru o bună separare a moleculelor prin electroforeză pe gel. Electroforeza pe gel are un câmp electric conectat la două capete ale gelului. Un capăt al gelului prezintă o sarcină pozitivă, în timp ce celăl alt capăt este încărcat negativ.
ADN-ul și ARN-ul sunt molecule încărcate negativ. Odată ce sunt încărcate în gel de la capătul negativ al gelului și aplicate pe câmpul electric, ele migrează prin porii gelului către capătul încărcat pozitiv al gelului. Viteza de migrare depinde de sarcina și dimensiunea moleculei. Moleculele mai mici migrează cu ușurință prin porii gelului decât moleculele mai mari. Prin urmare, moleculele mai mici călătoresc pe o distanță lungă prin gel, iar moleculele mai mari parcurg o distanță scurtă. Pentru a observa deplasarea moleculelor pe gel, se folosesc tipuri speciale de coloranți. Câmpul electric este aplicat pentru o anumită perioadă de timp și oprit pentru a preveni pierderea moleculelor și pentru a menține moleculele în pozițiile lor parcurse. În gel pot fi observate benzi diferite. Aceste benzi reprezintă molecule de diferite dimensiuni. Prin urmare, electroforeza pe gel este utilă pentru a diferenția moleculele în funcție de dimensiunile lor.
Electroforeza pe gel este încorporată în diferite tehnici ca tehnică de pregătire în biologia moleculară, cum ar fi PCR, RFLP, clonare, secvențiere ADN, Southern blotting, cartografiere a genomului etc.
Figura 01: Electroforeză pe gel de agaroză
Ce este pagina SDS?
Electroforeza pe gel de poliacrilamidă cu dodecil sulfat de sodiu (pagina SDS) este un tip de electroforeză pe gel utilizat pentru separarea proteinelor. Când electroforeza pe gel este utilizată pentru a separa proteinele, sunt necesare tratamente speciale, deoarece proteinele nu sunt încărcate negativ precum ADN-ul și ARN-ul și nu migrează spre capătul pozitiv sau spre capătul negativ. Prin urmare, proteinele sunt denaturate și acoperite cu o sarcină negativă înainte de electroforeza pe gel. Se face folosind un detergent numit dodecil sulfat de sodiu (SDS). Electroforeza pe gel care utilizează SDS și un gel de poliacrilamidă pentru mediul de susținere este cunoscută sub numele de Pagina SDS. Această tehnică este folosită în mod obișnuit în biochimie, genetică, criminalistică și biologie moleculară.
În timpul paginii SDS, proteinele sunt amestecate cu SDS. SDS desfășoară proteinele într-o formă liniară și le acoperă cu o sarcină negativă proporțională cu masa lor moleculară. Datorită sarcinii negative, moleculele de proteine migrează spre capătul de sarcină pozitivă al gelului și se separă în funcție de masele lor moleculare. În SDS Page, poliacrilamida este folosită ca suport solid pentru gel. Separarea efectivă a proteinelor depinde în principal de proprietățile gelului. Prin urmare, prepararea gelului de poliacrilamidă trebuie făcută cu atenție și trebuie utilizate concentrații corecte de poliacrilamidă. Gelurile de poliacrilamidă prezintă o rezoluție în altă decât gelurile de agaroză. Prin urmare, pagina SDS este considerată o tehnică de în altă rezoluție pentru separarea proteinelor.
SDS Pagina este un tip de electroforeză pe gel denaturant. Are o limitare majoră în analiza proteinelor. Deoarece SDS denaturează proteinele înainte de separare, nu permite detectarea activității enzimatice, a interacțiunilor de legare a proteinelor, a cofactorilor proteici etc.
Figura 02: Pagina SDS
Care este diferența dintre electroforeza pe gel și pagina SDS?
Electroforeză pe gel vs pagina SDS |
|
| Electroforeza pe gel este o metodă efectuată pentru a separa macromoleculele folosind un câmp electric. | SDS Page este o tehnică de electroforeză pe gel de în altă rezoluție folosită pentru a separa proteinele în funcție de masa lor. |
| Gel Run | |
| Poate fi efectuată orizontal sau vertical. | Pagina SDS rulează întotdeauna pe verticală. |
| Baza pentru separare | |
| Separarea are loc în funcție de încărcare și dimensiune. | Separarea proteinelor are loc în funcție de masă și sarcină. |
| Rezoluție | |
| Electroforeza pe gel de agaroză are o rezoluție scăzută, iar electroforeza pe gel de poliacrilamidă are o rezoluție mai mare | Pagina SDS are o rezoluție mai bună. |
| Denaturare | |
| Electroforeza pe gel include atât tehnici de denaturare, cât și tehnici nedenaturante. | SDS Pagina denaturează proteinele înainte de separare. |
Rezumat – Electroforeza pe gel vs pagina SDS
Electroforeza pe gel este o tehnică comună utilizată pentru separarea și analiza ADN-ului, ARN-ului și proteinelor pe baza dimensiunii și încărcăturii acestora. Există două tipuri principale de electroforeză pe gel și anume electroforeza pe gel de agaroză și electroforeza pe gel de poliacrilamidă. Gelurile de agaroză sunt utilizate în principal pentru separarea acidului nucleic; când este necesară o rezoluție mai mare, se folosesc geluri de poliacrilamidă. Pagina SDS este un tip de electroforeză pe gel utilizat în mod obișnuit pentru a separa amestecuri complexe de proteine. Este considerată o tehnică de separare a proteinelor de în altă rezoluție. Aceasta este diferența dintre electroforeza pe gel și pagina SDS.
