Diferența cheie dintre electroforeza pe gel de agaroză și poliacrilamidă este că electroforeza pe gel de agaroză folosește geluri de agaroză turnate orizontal pentru a separa fragmente comparativ mai mari de ADN, în timp ce electroforeza pe gel de poliacrilamidă folosește geluri de poliacrilamidă turnate vertical pentru a separa fragmente mai scurte de acid nucleic..
Electroforeza este un tip de tehnică care utilizează un câmp electric aplicat pe o matrice de gel pentru a separa biomolecule precum ADN-ul, ARN-ul și proteinele. Această separare a biomoleculelor precum ADN, ARN și proteine prin electroforeză se bazează pe sarcină și dimensiune. Probele sunt încărcate în godeurile gelului. Mai târziu, câmpul electric este aplicat peste gel. Câmpul face ca moleculele încărcate negativ să se deplaseze către electrodul pozitiv. Matricea de gel acționează ca o sită moleculară prin care cele mai mici molecule trec sau călătoresc rapid, în timp ce moleculele mai mari se mișcă încet. Acest lucru permite separarea moleculelor în funcție de sarcină și dimensiune. Prin urmare, electroforeza pe gel de agaroză și poliacrilamidă sunt două tipuri de tehnici de electroforeză pe gel care ajută în principal la separarea moleculelor în funcție de dimensiunea și încărcarea lor.
Ce este electroforeza pe gel de agaroză?
Electroforeza pe gel de agaroză este o tehnică care utilizează geluri de agaroză pentru a separa biomolecule precum ADN și ARN. Este o tehnică folosită pentru a separa acizii nucleici în primul rând după dimensiune. Principalul compus numit agaroză folosit în această tehnică este o polizaharidă. Provine din alge marine. Agaroza poate fi dizolvată în tampon de fierbere și apoi poate fi turnată într-o tavă care se ține orizontal. În tavă, se solidifică atunci când se răcește pentru a forma o placă. Gelurile de agaroză sunt turnate cu un pieptene pentru a face godeuri în care sunt încărcați acizi nucleici, cum ar fi ADN sau ARN, odată ce gelul s-a solidificat.
Figura 01: Electroforeza pe gel de agaroză
Gelul este ulterior scufundat într-un tampon adecvat și se aplică un curent peste gel. ADN-ul are o sarcină negativă uniformă care este independentă de compoziția secvenței moleculei. Prin urmare, moleculele de ADN vor migra de la catod (-) spre anod (+). Rata de migrare depinde direct de dimensiunea moleculei. Cele mai mari macromolecule au cea mai dificilă navigare prin gel. Pe de altă parte, macromoleculele mai mici alunecă prin gel rapid și destul de ușor.
Ce este electroforeza pe gel de poliacrilamidă?
Electroforeza pe gel de poliacrilamidă (PAGE) este o tehnică care utilizează geluri de poliacrilamidă pentru a separa biomoleculele. Este o tehnică care este utilizată pe scară largă pentru a separa macromoleculele biologice, de obicei proteine și acizi nucleici, în funcție de mobilitatea lor electroforetică. Hidratarea acrilonitrilului are ca rezultat formarea de molecule de acrilamidă de către nitril hidraza. Acrilamida este solubilă în apă, iar la adăugarea de inițiatori de radicali liberi, acrilamida polimerizează, rezultând formarea gelului de poliacrilamidă. În mod normal, concentrațiile crescute de acrilamidă au ca rezultat scăderea dimensiunii porilor din gel. Gelurile de poliacrilamidă sunt turnate vertical, spre deosebire de gelurile de agaroză.
Figura 02: Electroforeza cu gel de poliacrilamidă
În electroforeza pe gel de poliacrilamidă, moleculele pot rula în starea lor nativă, păstrând structura de ordin superior a moleculelor. Această metodă se numește PAGE nativă. Alternativ, se poate adăuga și un denaturant chimic pentru a îndepărta structura de ordin superior și a transforma molecula într-o moleculă nestructurată a cărei mobilitate depinde doar de lungimea sa. Acest tip se numește SDS-PAGE.
Care sunt asemănările dintre agaroză și electroforeza pe gel de poliacrilamidă?
- Electroforeza pe gel de agaroză și poliacrilamidă sunt două tipuri de tehnici de electroforeză pe gel.
- De fapt, sunt tehnici biologice moleculare.
- Ambele tehnici sunt folosite pentru a detecta macromolecule biologice precum ADN-ul și proteinele.
- Aceste tehnici sunt realizate de tehnicieni sau cercetători calificați.
- În ambele tehnici, separarea macromoleculelor se bazează pe sarcină și dimensiune.
- Ambele tehnici permit separarea acizilor nucleici precum ADN și ARN.
Care este diferența dintre electroforeza în gel de agaroză și poliacrilamidă?
Electroforeza pe gel de agaroză este o tehnică care utilizează geluri de agaroză turnate orizontal pentru a separa biomoleculele, în timp ce electroforeza pe gel de poliacrilamidă este o tehnică care utilizează geluri de poliacrilamidă turnate pe verticală pentru a separa biomoleculele. Aceasta este diferența cheie dintre electroforeza pe gel de agaroză și poliacrilamidă. În plus, electroforeza pe gel de agaroză este utilizată pentru separarea ADN-ului și ARN-ului, în timp ce electroforeza pe gel de poliacrilamidă este utilizată pentru separarea acizilor nucleici precum ADN-ul, ARN-ul sau proteinele.
Următorul tabel rezumă diferența dintre electroforeza pe gel de agaroză și poliacrilamidă.
Rezumat – Electroforeza pe gel de agaroză vs poliacrilamidă
Electroforeza pe gel de agaroză și poliacrilamidă sunt două tipuri de tehnici de electroforeză pe gel utilizate în laboratoarele de biologie moleculară. Electroforeza pe gel de agaroză folosește un gel de agaroză pentru a separa biomoleculele. Agaroza nu este, în general, toxică pentru oameni, în timp ce poliacrilamida este toxică pentru oameni. În plus, electroforeza pe gel de agaroză arată o rezoluție scăzută, în timp ce electroforeza pe gel de poliacrilamidă arată o rezoluție mai mare. Electroforeza pe gel de poliacrilamidă utilizează un gel de poliacrilamidă pentru a separa biomoleculele. Aceasta rezumă diferența dintre electroforeza pe gel de agaroză și poliacrilamidă
