Diferența cheie dintre RP HPLC și HIC este că RP HPLC utilizează o fază mobilă mai polară și o fază staționară mai puțin polară. În timp ce, HIC utilizează o fază staționară hidrofobă care permite moleculelor hidrofobe să se atașeze de ea.
Cromatografia este o tehnică analitică care ajută la separarea unui amestec în componentele sale. În primul rând, trebuie să dizolvăm proba pentru a fi separată într-o soluție. Acest amestec soluție-substanță se numește fază mobilă. Apoi faza mobilă este trecută printr-un alt material numit faza staționară. Faza staționară determină separarea componentelor. Separarea are loc datorită împărțirii materialului între faza mobilă și faza staționară.
Ce este RP HPLC?
Termenul RP HPLC înseamnă cromatografie lichidă de în altă performanță cu fază inversă. Presupune separarea componentelor intr-un amestec, in functie de hidrofobicitate. Componentele hidrofobe din faza mobilă se leagă de liganzii hidrofobi imobilizați de pe faza staționară, în timp ce componentele hidrofile eluează prin faza staționară fără a se atașa de suprafața fazei staționare.
Figura 01: Aparat HPLC
În plus, această metodă are o reproductibilitate mai mare în comparație cu alte tehnici cromatografice și arată, de asemenea, o aplicabilitate largă. Prin urmare, folosim această metodă în laboratoare pentru peste 75% din toate metodele HPLC. De cele mai multe ori, folosim un amestec apos de apă cu un solvent organic polar miscibil ca fază mobilă. Astfel, se va asigura atașarea componentelor hidrofobe din soluție la suprafața fazei staționare.
Ce este HIC?
Termenul HIC înseamnă cromatografie de interacțiune hidrofobă. Este un tip de HPLC cu fază inversă, iar această metodă este utilizată în principal pentru separarea biomoleculelor mari, cum ar fi proteinele. În această metodă, trebuie să folosim un mediu apos pentru a face proba biomoleculei. Se datorează faptului că solvenții organici pot provoca denaturarea proteinelor. Mai mult, această tehnică folosește interacțiunea dintre molecule mari cu o suprafață ușor hidrofobă a fazei staționare. În plus, trebuie să folosim o concentrație mare de sare în probă, deoarece încurajează reținerea proteinei pe ambalaj; acest proces se numește sărare. Scăzând treptat concentrația de sare, putem face ca biomoleculele să elueze separat, în funcție de hidrofobicitatea lor.
De obicei, această metodă folosește condițiile opuse cromatografiei cu schimb de ioni. În această tehnică, mai întâi, trebuie să trecem o soluție tampon prin coloană pentru a reduce solvația de soluție din probă. Face ca regiunile hidrofobe ale proteinei să se expună. Cu toate acestea, atunci când molecula este mai hidrofobă, este necesară mai puțină sare pentru a promova legarea. Aici, substanțele dizolvate mai puțin hidrofobe sunt eluate mai întâi și, în funcție de modificarea concentrației de sare, mai multe substanțe dizolvate hidrofobe sunt eluate în ultimul rând.
Care este diferența dintre RP HPLC și HIC?
Cromatografia este o tehnică analitică pentru separarea componentelor dintr-un amestec. RP HPLC și HIC sunt două tehnici cromatografice specializate. Diferența cheie dintre RP HPLC și HIC este că RP HPLC utilizează o fază mobilă mai polară și o fază staționară mai puțin polară, în timp ce HIC folosește o fază staționară hidrofobă, care permite moleculelor hidrofobe să se atașeze de ea.
Infografia de mai jos rezumă diferența dintre HPLC RP și HIC.
Rezumat – RP HPLC vs. HIC
Cromatografia este o tehnică analitică pentru separarea componentelor dintr-un amestec. RP HPLC și HIC sunt două tehnici cromatografice specializate. Diferența cheie dintre RP HPLC și HIC este că RP HPLC utilizează o fază mobilă mai polară și o fază staționară mai puțin polară, în timp ce HIC utilizează o fază staționară hidrofobă, care permite moleculelor hidrofobe să se atașeze de ea.
