Diferența cheie FPLC și HPLC este că FPLC este un tip de cromatografie lichidă care purifică biomolecule mari, cum ar fi proteinele, nucleotidele și peptidele, în timp ce HPLC este un tip de cromatografie lichidă care separă compușii cu greutate moleculară mică.
Cromatografia lichidă este o tehnică utilizată pentru a separa o probă în componentele sale individuale. Această separare are loc datorită interacțiunii probelor specifice cu fazele mobile și staționare. Componentele dintr-o probă sunt separate pe baza afinității fiecărei componente pentru faza mobilă în cromatografia lichidă. Pe măsură ce faza mobilă și proba trec printr-o coloană, componentele probei încep să se separe în benzi care pot fi detectate prin spectroscopie UV-VIS. Prin urmare, FPLC și HPLC sunt două tipuri de tehnici de cromatografie lichidă.
Ce este FPLC?
FPLC este un tip de cromatografie lichidă care purifică biomolecule mari, cum ar fi proteinele, nucleotidele și peptidele. Cromatografia lichidă rapidă a proteinelor (FPLC) a fost dezvoltată și comercializată pentru prima dată în Suedia de compania Pharmacia în 1982. Este adesea folosită pentru a analiza sau purifica amestecurile de proteine. Aceasta are loc pe baza principiului afinităților componentelor probei pentru fluidul în mișcare (fază mobilă) și un material solid poros (fază staționară). În FPLC, faza mobilă este un tampon, iar faza staționară este o rășină compusă din margele. De obicei, constă din agaroză reticulată, ambalată într-o coloană cilindrică din sticlă sau plastic.
Figura 01: Aparatul FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography)
În majoritatea strategiei FLPC, se folosește rășina schimbătoare de ioni. Prin urmare, proteina de interes se va lega de rășină printr-o interacțiune de sarcină. Tehnica FLPC folosește, de asemenea, două tampoane: tamponul 1 (tamponul de rulare) și tamponul 2 (tamponul de eluție). Inițial, când se rulează tamponul și amestecul de probă prin coloană, proteina de interes din amestec se va lega de rășină printr-o interacțiune de sarcină. Dar proteina de interes devine disociată și revine la soluția din tampon de eluție atunci când tamponul de eluție trece prin coloană la sfârșitul procesului. Ulterior, soluția (eluant care conține proteină de interes) trece prin două detectoare, care măsoară concentrația de sare și concentrația de proteine. Pe măsură ce fiecare proteină este eluată, aceasta apare ca un „vârf” în timpul detectării și poate fi colectată pentru utilizare ulterioară.
Ce este HPLC?
HPLC este un tip de cromatografie lichidă care separă compuși cu greutate moleculară mică. În 1969, primul HPLC a fost fabricat comercial de Waters Corporation, SUA. În cromatografia lichidă de în altă performanță (HPLC), un amestec de probă (analit) într-un solvent (fază mobilă) este pompat printr-o coloană cu material de umplere cromatografic (fază staționară) la presiune ridicată. Amestecul de probă este transportat de un curent de gaz purtător în mișcare de heliu sau azot.
Figura 02: HPLC (cromatografie lichidă de în altă performanță)
Componentele din amestecul de probă care au cea mai mică interacțiune cu faza staționară sau cea mai mare cantitate de interacțiune cu faza mobilă vor ieși din coloană mai repede. Pe de altă parte, componentele din amestecul de probă care au cea mai mare cantitate de interacțiune cu faza staționară sau cea mai mică cantitate de interacțiune cu faza mobilă vor ieși din coloană mai lent. Pe baza principiului de interacțiune de mai sus, componentele amestecului de probă pot fi separate. Mai mult, detectorul instrumentului identifică fiecare componentă a amestecului de probă care iese din coloană. HPLC este utilizat pentru a inspecta probele de mediu și biologice pentru prezența sau absența compușilor cunoscuți, cum ar fi medicamente, toxine sau pesticide. Este utilizat în diferite industrii, cum ar fi farmaceutică, de mediu, criminalistică și chimică.
Care sunt asemănările dintre FPLC și HPLC?
- FPLC și HPLC sunt tipuri de cromatografie lichidă.
- Ambele sunt folosite pentru a separa și identifica probele biologice.
- Au o fază mobilă lichidă și o fază staționară solidă.
- Ambele tehnici folosesc o coloană pentru a trece prin eșantion.
- Aceste tehnici folosesc pompe, detectoare, supape și software pentru separarea și detectarea probelor.
Care este diferența dintre FPLC și HPLC?
FPLC este un tip de cromatografie lichidă care este utilizat pentru a purifica biomolecule mari, cum ar fi proteine, nucleotide și peptide. HPLC este un tip de cromatografie lichidă care este utilizată pentru a separa compuși cu greutate moleculară mică. Deci, aceasta este diferența cheie dintre FPLC și HPLC. Mai mult, FPLC folosește monitoare de pH și conductivitate, precum și colectoare de fracții. În schimb, HPLC nu utilizează monitoare de pH și conductivitate și colectoare de fracții.
Infograficul de mai jos enumeră mai multe diferențe între FPLC și HPLC sub formă tabelară.
Rezumat – FPLC vs HPLC
Cromatografia este o tehnică analitică de laborator utilizată pentru separarea componentelor dintr-un amestec. Este împărțit în mai multe tipuri, cum ar fi cromatografia pe coloană, cromatografia în gaz, cromatografia lichidă, cromatografia cu schimb de ioni, etc. FPLC și HPLC sunt două tipuri de tehnici de cromatografie lichidă. FPLC este un tip de cromatografie lichidă care este utilizată pentru a purifica biomolecule mari, cum ar fi proteine, nucleotide și peptide. Pe de altă parte, HPLC este un tip de cromatografie lichidă care este utilizată pentru a separa compuși cu greutate moleculară mică. Astfel, acesta este rezumatul care este diferența dintre FPLC și HPLC.
