Diferența cheie dintre HPLC cu fază inversă și fază normală este că HPLC cu fază inversă utilizează o fază staționară nepolară și o fază mobilă polară, în timp ce HPLC cu fază normală folosește o fază staționară polară și o fază mobilă mai puțin polară.
HPLC în fază normală este cea mai veche tehnică de HPLC pe care Tswett a folosit-o în separările sale de extracte de plante; a folosit cretă într-o coloană de sticlă. Acesta a fost modul clasic de cromatografie care a condus la denumirea lui drept tehnica „normală”. HPLC cu fază inversă, pe de altă parte, este opusul tehnicii normale, pe care oamenii de știință au dezvoltat-o în ultimul timp.
Ce este HPLC cu fază inversă?
HPLC cu fază inversă este o tehnică cromatografică în care folosim o fază staționară hidrofobă. Dintre toate metodele HPLC, folosim această metodă pentru aproximativ 70% din cauza aplicabilității sale largi și a reproductibilității. Faza staționară este nepolară, iar faza mobilă este polară.
De cele mai multe ori, oamenii de știință folosesc ca fază mobilă un amestec apos de apă cu un solvent organic polar miscibil, cum ar fi acetonitril sau metanol. Prin urmare, analiții interacționează cu faza staționară nepolară.
Ce este HPLC în fază normală?
HPLC în fază normală este o tehnică cromatografică în care folosim o fază staționară hidrofilă. Este metoda tradițională de HPLC, deși nu o folosim atât de mult. Faza staționară este polară, iar faza mobilă este nepolară. Mai important, faza mobilă a acestei tehnici este 100% organică. Înseamnă că nu se folosește apă pentru aceasta.
Figura 01: Un profil de probă pentru cromatogramele HPLC în fază normală și fază inversă în funcție de polaritatea componentelor din analit.
De obicei, faza staționară conține faze de silice, ciano, diol, faze legate de amino etc. Fazele mobile includ solvenți organici precum hexan, acetat de etil etc. Această tehnică se bazează pe reținerea moleculelor de solvent sau analit pe faza staționară polară.
Care este diferența dintre HPLC în fază inversă și fază normală?
HPLC cu fază inversă este o tehnică cromatografică în care folosim o fază staționară hidrofobă. Faza staționară a acestei tehnici este nepolară, în timp ce faza mobilă este polară. Mai mult, oamenii de știință folosesc un amestec apos de apă cu un solvent organic polar miscibil, cum ar fi acetonitril sau metanol, ca fază mobilă în HPLC cu fază inversă. În schimb, HPLC în fază normală este o tehnică cromatografică în care folosim o fază staționară hidrofilă. Faza staționară a acestei tehnici este polară, în timp ce faza mobilă este nepolară. În plus, oamenii de știință folosesc solvenți organici, cum ar fi hexan, acetat de etil etc., ca fază mobilă a HPLC în fază normală. Infograficul de mai jos prezintă diferența dintre HPLC în fază inversă și fază normală într-o formă tabelară.
Rezumat – HPLC cu fază inversă vs fază normală
Tehnicile HPLC cu fază inversă și fază normală sunt două tehnici de cromatografie lichidă. Diferența cheie dintre HPLC cu fază inversă și fază normală este că HPLC cu fază inversă utilizează o fază staționară nepolară și o fază mobilă polară, în timp ce HPLC cu fază normală folosește o fază staționară polară și o fază mobilă mai puțin polară.
