Diferența cheie dintre Elisa și Elispot este că Elisa este un test imunosorbent legat de enzime care determină concentrația totală a proteinelor de semnalizare secretate, în timp ce Elispot este un test imunosorbant legat de enzime care detectează celulele individuale secretoare de citokine.
Elisa și Elispot sunt două teste imunosorbente legate de enzime utilizate pe scară largă în medicină, patologia plantelor, biotehnologie și diferite industrii farmaceutice. În aceste tehnici, un analit proteic este detectat de un anticorp îndreptat împotriva acestuia. Elisa este cel mai popular test imunosorbent legat de enzime utilizat în laboratoare. Pe de altă parte, Elispot este un test imunosorbent legat de enzime care nu este utilizat în locul Elisa, ci mai degrabă utilizat în laboratoare pe lângă Elisa.
Ce este Elisa Assay?
Elisa este un test imunosorbent legat de enzime care determină concentrația totală a proteinelor de semnalizare secretate. Este un test de biochimie analitică utilizat pe scară largă, care a fost descris pentru prima dată de Engvall și Perlmann în 1971. Această tehnică folosește un tip de imunotest enzimatic în fază solidă pentru a detecta prezența unei proteine specifice într-o probă lichidă folosind anticorpi direcționați împotriva acestei proteine specifice. Acest test este un instrument de diagnostic utilizat în mod obișnuit în medicină, patologia plantelor și biotehnologie.
Mecanismul testului ELISA
În majoritatea testului ELISA, o cantitate necunoscută de antigen este imobilizată pe un suport solid (placă de microlitru) la început. Apoi anticorpul primar potrivit este aplicat peste suprafața suport solidă. Acest anticorp formează un complex cu antigenul (complex antigen-anticorp). Anticorpul primar legat de antigen poate fi detectat de un anticorp secundar care este legat de o enzimă prin bioconjugare. În etapa finală a testului Elisa se adaugă o substanță care conține substratul enzimei. Dacă există o legare adecvată a unui anticorp primar la antigen, substratul produce o schimbare de culoare detectabilă. În cele din urmă, aceasta cuantifică antigenul din probă.
Figura 01: Diferite tipuri de Elisa
În plus, există diferite abordări ale lui Elisa, cum ar fi Elisa directă și Elisa indirectă. În prezent, diferite teste Elisa sunt utilizate pentru a detecta agenți patogeni umani cum ar fi Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, virusul hepatitei B, virusul hepatitei C, E.coli producătoare de enterotoxină, HIV și SARS-CoV-2.
Ce este testul Elispot?
Elispot este un test imunosorbant legat de enzime care detectează celulele individuale secretoare de citokine. Cecil Czerkinsky a descris pentru prima dată ELISpot în 1983. Este un tip de analiză care se concentrează pe măsurarea cantitativă a frecvenței secreției de citokine pentru o singură celulă. De asemenea, este clasificată ca o tehnică care utilizează anticorpi pentru a detecta un analit proteic biologic sau chimic. Testul Fluorospot este o variație a testului Elispot, care utilizează fluorescența pentru a analiza mai mulți analiți (proteine mai secrete).
Mecanismul testului Elispot
În acest mecanism, anticorpii monoclonali specifici pentru citokine sunt adăugați inițial în godeurile plăcilor de microlitri. Apoi celulele dorite care sunt observate sunt adăugate în godeuri. Ulterior, celulele sunt incubate. În timpul incubației celulelor, celulele sunt lăsate să reacționeze la orice stimul și să secrete citokină. Citokinele care au fost secretate de celulele incubate se vor atașa de anticorpi, deoarece celulele sunt înconjurate de anticorpi monoclonali specifici pentru citokine.
Figura 02: Testul Elispot
Pentru a detecta acești anticorpi monoclonali specifici pentru citokine, se adaugă în godeu anticorpi de detecție specifici biotinilați. Anticorpii de detecție specifici biotinilați captează anticorpii monoclonali specifici pentru citokine în godeuri. Mai mult, conjugații streptavidină-enzimă sunt adăugați în godeuri pentru a se lega cu anticorpii de detectare. În etapa finală, în godeuri sunt adăugate substraturi specifice. Reacțiile conjugatelor și substraturilor enzimatice produc pete distincte în godeuri. Aceste puncte distincte sunt citite pe un cititor automat ELISpot. În cele din urmă, aceasta va calcula în continuare frecvența secreției de citokine.
Care sunt asemănările dintre Elisa și Elispot?
- Ambele sunt teste imunosorbente legate de enzime.
- Ambele teste detectează anumiți analiți proteici.
- Aceste teste folosesc anticorpi specifici pentru a identifica analiții proteici.
- Ambele teste folosesc enzime și substraturi.
- Sunt folosite ca instrument de diagnostic în laboratoarele medicale.
Care este diferența dintre Elisa și Elispot?
Elisa este un test imunosorbent legat de enzime care determină concentrația totală a proteinelor de semnalizare secretate. Pe de altă parte, Elispot este un test imunosorbent legat de enzime care măsoară celulele individuale secretoare de citokine. Deci, aceasta este diferența cheie dintre Elisa și Elispot. Mai mult, în testul Elisa, antigenul este mai întâi imobilizat pe godeurile de microlitru. În schimb, în testul Elispot, anticorpul este mai întâi imobilizat pe godeurile de microlitru. Astfel, aceasta este o altă diferență între Elisa și Elispot.
Infografia de mai jos prezintă o analiză detaliată a diferenței dintre Elisa și Elispot sub formă tabelară.
Rezumat – Elisa vs Elispot
Elisa și Elispot sunt două teste imunosorbente legate de enzime utilizate pe scară largă în medicină, patologia plantelor, biotehnologie și diferite industrii farmaceutice. Elisa detectează prezența unui ligand (proteină) într-o probă lichidă folosind anticorpi direcționați împotriva ligandului de măsurat. Testul Elispot este o metodă utilizată pe scară largă pentru monitorizarea răspunsurilor imune. Detectează celulele individuale secretoare de citokine folosind anticorpi. Este atât o tehnică de imunotest, cât și de biotestare. Astfel, acesta este rezumatul diferenței dintre Elisa și Elispot.
