PCR vs PCR în timp real
PCR sau reacția în lanț a polimerazei este o descoperire revoluționată în biologia moleculară modernă, care a fost dezvoltată pentru prima dată de chimistul Kary Mullis în 1983. Acesta permite ca o singură secvență dintr-un ADN complex să fie amplificată pentru analiză. Ideea de bază a PCR este că doi primeri, care sunt complementari catenelor opuse ale unei secvențe de ADN, sunt orientați unul spre celăl alt; primerii produc catene complementare, fiecare conținând celăl alt primer. Prin urmare, rezultatul este o cantitate mare dintr-o secvență corespunzătoare ADN-ului care se află între cei doi primeri. Enzima ADN polimerază este utilizată pentru a extinde primerii în PCR. ADN polimeraza este o enzimă termostabilă și are capacitatea de a supraviețui la temperaturi ridicate (94 până la 95 °C) utilizată pentru denaturarea ADN-ului șablon.
PCR implică trei etape, și anume, runde repetate de denaturare, recoacere a primerilor și sinteza ADN. Pentru a efectua această reacție se folosește o mașină termociclată, astfel încât să poată fi programată să modifice temperaturile rapid și precis. Aplicațiile PCR sunt investigațiile penale, amprenta ADN, detectarea agenților patogeni și analiza ADN-ului speciilor umane timpurii.
Ce este PCR convențional?
Există trei etape majore ale PCR convenționale, și anume; Etapa de amplificare a ADN-ului, separarea PCR și detectarea produselor. Separarea segmentelor de ADN se face de obicei prin electroforeză pe gel de agaroză. Produsele sunt apoi colorate cu bromură de etheiduim. În cele din urmă, detectarea este realizată prin vizualizarea benzilor pe geluri sub lumină UV. Prin urmare, rezultatele finale ale PCR convenționale nu sunt exprimate ca numere. În mod normal, PCR convențional este capabil să detecteze doar un singur parametru.
Ce este PCR în timp real?
PCR în timp real poate detecta amplificarea produselor, pe măsură ce produsele sunt sintetizate. Odată cu dezvoltarea tehnologiei, PCR a devenit o tehnică foarte populară, în special pentru detectarea și identificarea bacteriilor din alimente. PCR în timp real folosește un sistem de colorare fluorescentă și un termociclator echipat cu capacitate de detectare fluorescentă.
Care este diferența dintre PCR convențională și PCR în timp real?
• PCR convențională necesită mai mult timp, deoarece utilizează electroforeza pe gel pentru a analiza produsele PCR amplificate. În schimb, PCR în timp real necesită mai puțin timp, deoarece poate detecta amplificările în fazele incipiente ale reacției.
• PCR în timp real colectează date în faza de creștere exponențială a PCR, în timp ce PCR tradițională colectează date la punctul final al reacției.
• Rezultatele punctului final ale PCR convenționale pot să nu fie foarte precise, dar rezultatele PCR în timp real sunt foarte precise.
• PCR în timp real este mai sensibilă decât PCR convențională.
• PCR convențională are o rezoluție foarte slabă, în timp ce PCR în timp real poate detecta modificări foarte mici datorită rezoluției în alte.
• Detectarea punctului final al PCR convențională are o gamă dinamică scurtă, în timp ce detectarea PCR în timp real are o gamă dinamică largă.
• Spre deosebire de PCR convențională, tehnicile de detectare automată se găsesc în PCR în timp real.
• PCR convențională este extrem de sofisticată și necesită forță de muncă mai mult decât PCR în timp real.
• Spre deosebire de PCR în timp real, PCR convențional nu poate face distincția între bacteriile moarte și cele vii.
• PCR în timp real folosește un sistem de colorare fluorescentă pentru a detecta produsele, în timp ce PCR convențională folosește bromură de etidio și lumină UV pentru a vizualiza benzile în mediul de gel de agaroză.
