Diferența cheie – ELISA directă vs indirectă
Un test imunologic legat de enzime (ELISA), cunoscut și sub denumirea de imunotest enzimatic, este un test serologic care detectează anticorpii din sânge. Este folosit ca instrument de diagnostic pentru a afla dacă pacientul a fost expus la un anumit tip de virus sau la un alt agent infecțios (antigen) și dacă organismul a produs anticorpi împotriva infecției. ELISA poate identifica, de asemenea, infecțiile trecute și actuale. Prin urmare, ELISA este adesea folosit ca test de prescreening de către medici înainte de analiza aprofundată a bolilor. Acest test poate fi efectuat în laborator prin prelevarea unei probe de sânge de la pacient. Există două tipuri de test ELISA: ELISA direct și ELISA indirect. Diferența cheie între ELISA directă și indirectă este că ELISA indirectă este mai sensibilă și necesită adăugarea unui anticorp secundar, în timp ce ELISA directă este mai puțin sensibilă și folosește doar un anticorp primar.
Ce este ELISA directă?
ELISA este un test de diagnosticare a bolii efectuat pentru a identifica prezența anumitor antigene sau anticorpi în sânge. Se face ca un test pe placă. Utilizează anticorpi legați cu enzime ușor de testat. Prezența antigenelor în proba de ser se leagă de anticorpi specifici legați de enzime. În etapa finală, se adaugă un substrat specific pentru a reacționa cu enzima. Enzima transformă substratul într-un produs colorat sau care produce semnal. Schimbarea de culoare a substratului chimic dezvăluie prezența unui anumit anticorp în proba de ser. Testul ELISA direct folosește doar un anticorp primar legat de enzimă. La legarea de antigen, acesta își schimbă rapid culoarea, indicând prezența agentului infecțios în sânge. Cu toate acestea, intensitatea semnalelor este mai slabă în ELISA direct, deoarece epitopii sunt limitați la legarea antigenelor. Prin urmare, ELISA directă este mai puțin sensibilă în comparație cu ELISA indirectă.
Figura 01: Test ELISA direct
Ce este ELISA indirect?
ELISA poate fi efectuat folosind două tipuri de anticorpi și anume; anticorp primar și anticorp secundar. Instrumentul ELISA indirect folosește ambele tipuri de anticorpi pentru a amplifica semnalele pentru o mai bună detectare. Tehnica ELISA indirectă se efectuează după cum urmează.
- Plăcile sunt incubate cu antigene și spălate pentru a bloca legarea nespecifică.
- Apoi se adaugă anticorpi primari și se spală.
- Se adaugă și se spală anticorpi secundari legați de enzime.
- Se adaugă un substrat și se lasă să reacționeze cu enzimele.
- Semnalele sunt detectate și se identifică prezența sau absența antigenului specific în probă.
În testul ELISA indirect, mai mulți anticorpi secundari se pot lega la un singur anticorp primar. Anticorpii secundari sunt legați de enzime ușor de testat. Prin urmare, o legare poate face un semnal puternic datorită mai multor interacțiuni. Prin urmare, ELISA indirectă este mai sensibilă decât ELISA directă. Cu toate acestea, ELISA indirect poate produce semnale nespecifice din cauza reacțiilor încrucișate ale anticorpilor secundari.
Figura 02: Test ELISA indirect
Care este diferența dintre ELISA direct și indirect?
ELISA direct versus indirect |
|
| ELISA direct este mai puțin sensibil în comparație cu ELISA indirect. | ELISA indirect este mai sensibil. |
| Timp luat | |
| Testul ELISA direct este un proces rapid. | ELISA indirect consuma mult timp. |
| Utilizarea anticorpilor | |
| În ELISA directă se utilizează un singur tip de anticorpi (anticorpi primari). | Anticorpii primari și secundari sunt utilizați pentru ELISA indirect. |
| Legătura cu enzimele | |
| Anticorpii primari sunt legați de enzime. | Anticorpii secundari sunt legați de enzime. |
| Reactivitate încrucișată a al doilea anticorp | |
| ELISA direct elimină reactivitatea încrucișată a al doilea anticorp. | ELISA indirect este afectat de reactivitatea încrucișată a al doilea anticorp. |
| Semnale | |
| Semnalele sunt slabe în comparație cu ELISA indirect. | Semnalele sunt amplificate în ELISA indirect. Prin urmare, este ușor de detectat. |
Rezumat – ELISA direct vs indirect
ELISA este o tehnică biochimică utilizată în principal în imunologie pentru a detecta prezența unui anticorp sau a unui antigen într-o probă de sânge a unui pacient. Poate fi realizat prin două procese cunoscute sub numele de ELISA directă sau indirectă. Testul ELISA direct folosește doar anticorpi primari pentru a detecta antigenul, în timp ce ELISA indirect folosește atât anticorpi primari, cât și secundari. În ELISA directă, anticorpii primari sunt marcați, în timp ce în ELISA indirect, anticorpii secundari sunt marcați. Aceasta este diferența dintre ELISA direct și indirect.
