Diferența cheie dintre GFP și EGFP este că GFP este o proteină de tip sălbatic încorporată în clonarea moleculară a celulelor non-mamifere, în timp ce EGFP este un tip îmbunătățit sau conceput de GFP care poate fi utilizat pe celulele de mamifere..
Clonarea moleculară este o tehnică avansată pe care oamenii de știință o folosesc enorm în exprimarea proteinelor prin tehnologia recombinantă. În tehnologia ADN-ului recombinant, este necesar să se transforme cu succes vectorul recombinant în organismul gazdă. Prin urmare, în timpul procesului de transformare, ar trebui să fie identificat și confirmat dacă gena de interes a fost sau nu transformată în gazdă. Pentru a evalua acest lucru, biologii moleculari adoptă mai multe tehnici. Dintre aceste tehnici, una este gena reporterului. Aceste gene reporter acționează ca markeri selectabili pentru a selecta transformanții corecti. Astfel, Green Fluorescent Protein (GFP) și Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) sunt două proteine reporter utilizate în clonarea moleculară.
Ce este GFP?
GFP este o proteină de tip sălbatic care conține 238 de resturi de aminoacizi și mai multe regiuni selectabile de secvențe de aminoacizi care o deosebesc de celel alte proteine fluorescente. În plus, această proteină de tip sălbatic a fost inițial izolată de Aequorea Victoria; un tip de meduză. Cu toate acestea, în fenomenele naturale, meduza a fost capabilă să producă fluorescență de culoare verde ca răspuns la anumiți stimuli.
Mai devreme, acest concept i-a surprins pe oamenii de știință și au decis să-l folosească pe tehnologiile lor ADN recombinant. În consecință, oamenii de știință au folosit această formă mutantă a genei de tip sălbatic ca genă reporter în studiile lor de expresie genetică. Gena de tip sălbatic a GFP este capabilă să producă o proteină care dă fluorescență la temperatura camerei sau sub lumină UV. Prin urmare, atunci când este introdus în transformanți, exprimă și produce fluorescență. Dacă fluorescența rezultă după procesul de transformare, aceasta confirmă succesul procesului de transformare. Cu cuvinte simple, emisia de fluorescență semnalează transformarea cu succes a vectorului care poartă gena de interes în gazdă.
Figura 01: GFP
Din acest motiv, GFP acționează ca un marker in vivo al expresiei genelor. În prezent, tehnicile de inginerie genetică sunt utilizate pentru a produce GFP. De asemenea, sunt disponibile multe versiuni îmbunătățite de GFP, cum ar fi EGFP. Prin urmare, acest lucru permite utilizarea eficientă a GFP în studiile de clonare moleculară și de exprimare a genelor.
Ce este EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein sau EGFP este o versiune îmbunătățită a GFP. Cu cuvinte simple, putem defini EGFP ca o versiune proiectată a GFP de tip sălbatic. Când gena de tip sălbatic a GFP mută, aceasta produce efecte benefice. Prin urmare, gena mutantă a GFP permite exprimarea de noi caractere și, ca urmare, putem produce GFP îmbunătățită cu caracteristici îmbunătățite. În plus, putem introduce mutații cu succes în gena GFP de tip sălbatic folosind iradiere sau metode chimice. Aceste gene mutante produc apoi EGFP, care are caracteristici mai benefice.
Figura 02: EGFP
Caracteristicile îmbunătățite ale EGFP sunt următoarele;
- Capabil să emită semnale de fluorescență mai puternice.
- Are sensibilitate ridicată.
- Se poate folosi pe celule de mamifere în loc de procariote și alte eucariote de nivel inferior.
- De asemenea, oferă o puritate sporită a produsului.
De aceea, în comparație cu GFP, EGFP este alegerea preferată pentru studiile de expresie genetică. Cu toate acestea, produsul este mai scump în comparație cu GFP.
Care sunt asemănările dintre GFP și EGFP?
- GFP și EGFP sunt două proteine care au capacitatea de a emite culoarea verde
- De aceea, ambele funcționează ca proteine reporter în studiile de expresie genetică.
- De asemenea, este posibil să le sintetizezi pe ambele folosind tehnologia ADN recombinant.
- În plus, este ușor să modificați în continuare aceste două tipuri pentru a sintetiza forme îmbunătățite.
Care este diferența dintre GFP și EGFP?
Gena reporter este o genă care se atașează cu gena de interes în tehnologia ADN-ului recombinant. Semnalizează transformarea cu succes a vectorului recombinant în gazdă. Aici, GFP și EGFP sunt două tipuri de proteine fluorescente verzi care funcționează ca proteine reporter. Cu toate acestea, diferența cheie dintre GFP și EGFP este că GFP este de tip sălbatic, în timp ce EGFP este o versiune proiectată a GFP. În plus, EGFP are caracteristici mai benefice decât GFP. De exemplu, EGFP produce lumină fluorescentă mai puternică și este mai sensibilă decât GFP. O altă diferență între GFP și EGFP este sistemele în care le putem folosi. Sistemele non-mamifere folosesc GFP, în timp ce sistemele de mamifere folosesc EGFP.
Infografia de mai jos prezintă diferența dintre GFP și EGFP sub formă tabelară.
Rezumat – GFP vs EGFP
GFP și EGFP sunt proteine reporter în studiile de clonare moleculară și expresie genetică. GFP este proteina de tip sălbatic, care este o proteină verde fluorescentă. Proteina a fost inițial izolată de meduza Aequorea victoria. În contrast, EFGP este o formă îmbunătățită a proteinei GFP. Este un mutant de tip sălbatic cu caracteristici îmbunătățite. Prin urmare, EFGP are o putere mai mare a semnalului și o sensibilitate mai mare. Prin urmare, îl putem folosi pe vectori mamifere. În schimb, utilizarea GFP este în principal numai pe vectori non-mamifere. În general, aceasta este diferența dintre GFP și EGFP.
