Diferența cheie dintre gradientul de zaharoză și ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză este că în ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză se folosește un gradient continuu de zaharoză, în timp ce în ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză se folosește un gradient discontinu de zaharoză.
Gradientul de zaharoză și ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză sunt două tipuri similare de tehnici utilizate pentru a separa anumite tipuri de macromolecule. În ambele tehnici, este utilizat un gradient de densitate a zaharozei. Dar în ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză, se utilizează un gradient de densitate continuu, în timp ce, în ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză, se utilizează un gradient de densitate discontinuu.
Ce este ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză?
Ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză este o tehnică care poate fi utilizată pentru a fracționa macromolecule precum ADN, ARN și proteine. Există mai mulți pași în această tehnică. Acestea sunt prepararea gradientului de zaharoză, centrifugare, separare și eluare. Pregătirea gradientului este pasul cheie în această tehnică. În această tehnică, proba care conține macromolecule de diferite dimensiuni este stratificată pe suprafața unei coloane cu gradient de zaharoză. La centrifugare, macromoleculele de diferite dimensiuni se sedimentează prin coloana de gradient de zaharoză la viteze diferite. Sedimentarea depinde de mai mulți factori, inclusiv forța de centrifugare, forma mărimii și densitatea macromoleculelor, densitatea și vâscozitatea gradientului. La sfârșitul centrifugării, macromoleculele sunt separate spațial prin densitate. Macromoleculele mai mari (macromolecule de mare densitate) sedimentează spre fund. Cele mai ușoare (macromolecule cu densitate scăzută) rămân în vârful gradientului. Prin urmare, moleculele se separă ca benzi diferite. Apoi benzile trebuie separate și purificarea macromoleculei specifice de zaharoză trebuie făcută.
Figura 01: Ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză
Pe partea de aplicare, această metodă este utilizată pe scară largă pentru fracţionarea moleculelor de ADN. Ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză este utilizată în mod obișnuit pentru a caracteriza dimensiunea și compoziția complexului proteic. În plus, această tehnică este utilizată pentru purificarea parțială a ARNm.
Ce este ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză?
Ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză este o altă tehnică care permite fracționarea macromoleculelor. Spre deosebire de ultracentrifugarea cu gradient de densitate a zaharozei, ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză utilizează un gradient de densitate discontinuu. Concentrația de zaharoză crește de sus în jos în trepte discrete. În această tehnică, separarea se realizează prin plasarea extractului clarificat deasupra unui volum mic de soluție de zaharoză într-un tub de centrifugă, așa-numita pernă de zaharoză. Acest lucru permite o mai bună separare în centrifugare de mare viteză. Când moleculele se separă ca o bandă între perna de zaharoză, banda albă poate fi colectată și purificată. În plus, impuritățile pot fi îndepărtate în continuare folosind metoda pernei de zaharoză. Metoda pernei de zaharoză permite umplerea a 60-70% din tub cu probă. Prin urmare, metoda pernei de zaharoză permite procesarea unui volum mai mare de probă.
Care sunt asemănările dintre gradientul de zaharoză și ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză?
- Gradientul de zaharoză și ultracentrifugarea pernă de zaharoză sunt două tehnici care sunt folosite pentru a separa un amestec de macromolecule.
- În ambele metode, se folosește un gradient de zaharoză.
- Centrifugarea este un pas în ambele metode.
- Moleculele se sedimentează ca o bandă sau zonă în fiecare metodă.
Care este diferența dintre gradientul de zaharoză și ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză?
Ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză este o tehnică care utilizează un gradient de zaharoză continuu în tubul de centrifugă, în timp ce ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză este o tehnică care utilizează un gradient de zaharoză discontinuu. Astfel, aceasta este diferența cheie dintre gradientul de zaharoză și ultracentrifugarea pernă de zaharoză.
În plus, ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză permite procesarea unui volum mai mare al probei, în timp ce ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză permite procesarea unui volum relativ scăzut al probei.
Mai jos infograficul prezintă mai multe diferențe între gradientul de zaharoză și ultracentrifugarea pernă de zaharoză.
Rezumat – Gradient de zaharoză vs ultracentrifugarea pernă de zaharoză
Ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză separă macromoleculele folosind un gradient continuu de zaharoză. În schimb, ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză utilizează un gradient discontinuu de zaharoză pentru a separa un anumit tip de particule dintr-un amestec. Deci, aceasta este diferența cheie dintre gradientul de zaharoză și ultracentrifugarea pernă de zaharoză. Metoda pernei de zaharoză permite colectarea particulelor intacte morfologic, deoarece nu provoacă stres mecanic, spre deosebire de ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză, care zdrobește moleculele pe fundul tubului. În plus, ultracentrifugarea cu pernă de zaharoză permite procesarea unui volum mai mare de probă decât ultracentrifugarea cu gradient de zaharoză.
