Diferența cheie – Pata Gram vs Acid Fast
Bacterii sunt microorganisme foarte mici. Sunt transparente, iar detectarea lor este dificilă în condiții de viață și nepătate. Astfel, sunt dezvoltate diverse metode de colorare pentru a facilita detectarea bacteriilor. Există trei tipuri majore de tehnici de colorare: colorare simplă, colorare diferențială și colorare structurală. Colorarea diferențială este o tehnică care utilizează mai mult de o colorare pentru a diferenția bacteriile. Colorația Gram și colorația acido-rezistentă sunt cunoscute cel mai popular ca pete diferențiale. Colorația Gram este o tehnică de colorare diferențială, care separă bacteriile în două grupuri cunoscute sub numele de bacterii Gram-pozitive și bacterii Gram-negative. Colorația acido-resistentă este o colorație diferențială utilizată pentru a identifica organisme acido-resistente, cum ar fi Mycobacterium, de organisme non-acido-resistente. Aceasta este diferența cheie dintre colorația Gram și colorația Acid Fast.
Ce este pata Gram?
Cotația Gram este o tehnică importantă de colorare diferențială utilizată pentru identificarea bacteriilor în microbiologie. Această tehnică a fost introdusă de bacteriologul danez Hans Christian Gram în 1884. Colorația Gram clasifică bacteriile în două grupuri majore numite gram pozitive și gram negative, care sunt foarte importante în clasificarea și identificarea bacteriilor. Microbiologii efectuează colorația Gram ca pas inițial în caracterizarea bacteriilor în timpul studiilor lor.
Bacterii sunt grupate în funcție de diferențele dintre peretele lor celular. Bacteriile Gram pozitive sunt compuse dintr-un strat gros de peptidoglican în peretele lor celular, în timp ce bacteriile Gram negative sunt compuse dintr-un strat subțire de peptidoglican în peretele lor celular. Rezultatul colorației Gram se va baza pe diferența de grosime a stratului de peptidoglican al peretelui celular.
Colorarea Grams se realizează folosind patru reactivi diferiți și anume; colorant primar, mordant, agent de decolorare și contrapată. Violetul cristal și safranina sunt folosite ca coloranți primari și respectiv contra, în timp ce gramele de iod și 95% alcool sunt folosite ca mordant și respectiv decolorant. Pașii de bază ai colorării cu grame sunt următorii;
- Se prepară un frotiu bacterian pe o lamă de sticlă curată, se fixează la căldură și se răcește.
- Frotiul este inundat cu cristal violet timp de 1 – 2 minute.
- Frotiul se clătește cu apă curentă de la robinet pentru a îndepărta petele în exces.
- Grame de iod se aplică pe frotiu timp de 1 minut.
- Frotiul se clătește cu apă curentă de la robinet
- Frotiul se spală cu alcool 95% timp de 2 – 5 secunde și se clătește cu apă curentă de la robinet.
- Frotiul este colorat în contra cu safranină timp de 1 minut
- Frotiul se clătește cu apă curentă de la robinet, se usucă și se observă la microscop.
La sfârșitul colorației Gram, bacteriile Gram negative vor fi observate în culoarea roz, în timp ce bacteriile Gram pozitive vor fi observate în culoarea violet.
Figura 01: bacterii Gram negative și Gram pozitive
Rezultatul colorației cu grame este decis de grosimea stratului de peptidoglican din peretele lor celular. În timpul etapei de decolorare, pata primară și mordantul sunt îndepărtate cu ușurință din bacteriile gram negative și devin incolore, deoarece au un strat subțire de peptidoglican. Pata primară este reținută în bacteriile gram pozitive, deoarece acestea au un strat gros de peptidoglican. Contrapata nu va fi eficientă pentru bacteriile gram pozitive din cauza reținerii petei primare. Astfel, bacteriile gram pozitive vor fi vizibile în culoarea primară, adică în culoarea violet. Contrapata va păta bacteriile Gram negative, iar acestea vor fi vizibile în culoarea alegerii, care este culoarea safraninei. Prin urmare, este ușor să clasificați bacteriile în două grupuri prin colorație Gram și este valoroasă în diferențierea și identificarea bacteriilor.
Ce este Acid Fast?
Rezistenta la acizi este o proprietate fizică a anumitor bacterii, în special rezistența lor la decolorarea de către acizi în timpul procedurilor de colorare. Odată colorate, aceste organisme rezistă procedurilor de decolorare pe bază de acid diluat sau etanol, comune în multe protocoale de colorare. Astfel, denumirea de „acid rapid” este dată acestor organisme. Această proprietate este demonstrată datorită unui nivel ridicat de material ceros (acizi micolici) în pereții lor celulari. Acest test este esențial pentru identificarea Mycobacterium tuberculosis.
Figura 2: Micobacterii acid-rapide
Această pată acid-resistentă a fost dezvoltată de Paul Ehrlich în 1882. Tehnica acid-resistentă a lui Ehrlich a fost modificată de Ziehl-Neelsen și este acum folosită mai frecvent. Procedura de colorare acid-rapidă implică trei reactivi diferiți. Carbol fuschin este folosit ca colorant primar. Alcoolul acid este folosit ca agent de decolorare. Albastrul de metilen este folosit ca contrapată. Procedura de colorare se efectuează după cum urmează.
- Pata primară (carbol fuchsin) este aplicată pe specimenul fixat pe lamă (Toate celulele vor fi colorate în roșu).
- Lama este încălzită prin abur timp de 5 minute, ceea ce duce corect petele în celule.
- Apoi se adaugă soluția de decolorare (Acest lucru elimină colorantul roșu din toate celulele, cu excepția bacteriilor acido-resistente).
- Albastrul de metilen este adăugat ca contrapată (colorează toate celulele bacteriene decolorate).
- Bacteriile acid-rapide rămân roșii, în timp ce bacteriile neacid-rapide se colorează în albastru.
Care sunt asemănările dintre colorația Gram și acid Fast?
- Cotația Gram și Acid fast sunt două tehnici diferențiate de colorare.
- Ambele tehnici clasifică bacteriile în două grupuri.
- Ambele tehnici folosesc două pete și una de decolorare.
Care este diferența dintre colorația Gram și acid Fast?
Pata Gram vs Acid Fast |
|
| Cotația Gram este o tehnică de colorare diferențială, care separă bacteriile în două grupuri bacterii Gram-pozitive și bacterii Gram-negative. | Pata Acid Fast este un colorant diferential folosit pentru a identifica organismele acido-resistente de organismele neacido-resistente. |
| Pata primară | |
| Crystal violet este colorația primară folosită în mod obișnuit în colorația Gram. | Carbol fuchsin este colorația principală utilizată în acid-fast. |
| Agent de decolorare | |
| alcool 95% este folosit ca agent de decolorare în pata de gram. | Alcoolul acid este folosit ca agent de decolorare în regim acid-fast. |
| Pata de contra | |
| Pata Gram foloseste safranina ca contrapata. | Pata acid-fast folosește albastru de metilen ca contrapată. |
| Observație | |
| Bacterii Gram negative sunt observate în culoarea alegerii, iar bacteriile Gram pozitive sunt observate în culoarea violet. | Bacteriile acid-rapide sunt observate în culoarea roșie, iar bacteriile non-acid-rapide sunt observate în culoarea albastră. |
Rezumat – Colorarea Gram vs Acid Fast
Vizualizarea microorganismelor în stare de viață este dificilă. Prin urmare, petele biologice și procedurile de colorare sunt utilizate pe scară largă pentru a le studia proprietățile. Colorarea diferențială este un tip de tehnică de colorare utilizată pentru a diferenția bacteriile. Colorația Gram și colorația acid-rapidă sunt două tehnici diferențiate de colorare. Colorația Gram diferențiază bacteriile Gram negative și bacteriile Gram pozitive în funcție de grosimea pereților celulari. Colorarea acidului rapid diferențiază bacteriile acido-resistente de bacteriile non-acido-resistente pe baza conținutului de acid micolic din peretele celular. Aceasta este diferența dintre colorarea acidă rapidă și cea gram.
Descărcați versiunea PDF a Gram Stain vs Acid Fast
Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți utiliza în scopuri offline, conform nota de citare. Vă rugăm să descărcați versiunea PDF aici Diferența dintre colorarea Gram și acid Fast.
