Diferența cheie – Nitroceluloză vs PVDF
Western blotting este o metodă care permite detectarea și cuantificarea proteinelor specifice dintr-o probă de proteine. Fiabilitatea tehnicii depinde de selectarea unei membrane corecte pentru absorbția proteinelor din gel. Există diferite tipuri de membrane microporoase. Membranele de nitroceluloză și PVDF sunt două astfel de membrane preferate de cercetători datorită atributelor lor speciale față de celel alte tipuri de membrane. Selectarea dintre nitroceluloză sau PVDF este, de asemenea, o altă provocare în western blotting. Atât nitroceluloza, cât și PVDF au o capacitate mare de absorbție a proteinelor. Diferența cheie dintre nitroceluloză și membrana PVDF este că membranele de nitroceluloză nu au capacitatea de a îndepărta anticorpii și de a reutiliza membrana pentru reprobarea anticorpilor, în timp ce membranele PVDF au capacitatea de a îndepărta și de a reutiliza.
Ce este nitroceluloza?
Nitroceluloza este un polimer fabricat prin tratarea celulozei cu acid azotic și este folosită pentru a face membrane microporoase în biologia moleculară, în special pentru tehnici de blotting precum Southern, Northern și western blotting. Dimensiunile porilor membranelor de nitroceluloză variază de la 3 la 20 µm. Membranele microporoase de nitroceluloză facilitează detectarea reacțiilor imunochimice care au loc pe suprafața membranei. Prin urmare, membranele de nitroceluloză sunt utilizate frecvent pentru imobilizarea proteinelor și detectarea proteinelor specifice în western blot. Membranele de nitroceluloză pot, de asemenea, imobiliza glicoproteinele și acizii nucleici.
Membranele de nitroceluloză sunt preferate în testele cu flux lateral datorită mai multor caracteristici. Membranele de nitroceluloză absorb proteinele la o concentrație mare. Solventul utilizat pentru umezirea membranei nu diminuează absorbția proteinelor din membrana nitrocelulozei. Membranele de nitroceluloză pot fi tăiate cu ușurință la dimensiunea dorită a gelului și pot transfera proteinele din gel pe membrană prin transfer electric sau capilar. Nitroceluloza permite fluxul mai rapid al proteinelor prin membrană cu potențial ridicat de legare. Nitroceluloza prezintă o rezistență îmbunătățită la manipulare. Un alt atribut special al membranei de nitroceluloză este că poate fi lipită cu ușurință cu adezivi rezistenți la apă fără solvenți pe diferite suporturi din plastic.
Figura 01: Membrană de nitroceluloză pentru western blot
Ce este PVDF?
Difluorura de poliviniliden (PVDF) este fluoropolimer produs prin polimerizarea difluorurii de viniliden și are o capacitate mare de imobilizare a proteinelor. Prin urmare, membranele microporoase din PVDF sunt utilizate în tehnicile de western blot pentru a analiza proteine specifice din amestecurile de proteine. Membranele PVDF pot fi utilizate și pentru analiza aminoacizilor și secvențierea proteinelor. Cea mai importantă caracteristică a membranei PVDF peste membrana de nitroceluloză este că poate fi îndepărtată cu ușurință de anticorpi și reutilizată pentru sondele de anticorpi ulterioare.
Membranele PVDF sunt mai groase decât membranele de nitroceluloză; prin urmare, mai rezistent la deteriorări în timpul reutilizarii. Membranele PVDF sunt foarte hidrofobe. Prin urmare, trebuie să fie înmuiate în metanol sau izopropanol înainte de utilizare.
Care este diferența dintre nitroceluloză și PVDF?
Nitroceluloză vs PVDF |
|
| Nitroceluloza este un polimer compus din celuloză. | PVDF este un fluoropolimer produs prin polimerizarea difluorurii de viniliden. |
| Dimensiunea porilor membranei | |
| Dimensiunile tipice ale porilor sunt 0,1, 0,2 sau 0,45μ | Dimensiunile tipice ale porilor sunt 0,1, 0,2 sau 0,45μm |
| Capacitate de legare a proteinelor | |
| Nitroceluloza are o capacitate de legare la proteine de la 80 la 100 μg/cm2. | PVDF are o capacitate de legare a proteinelor de 170 până la 200 μg/cm2. |
| Sensibilitate | |
| Acesta are o sensibilitate scăzută în comparație cu PVDF. | Acesta are o sensibilitate ridicată. |
| Detectarea proteinelor slab exprimate | |
| Deoarece sensibilitatea este scăzută în membranele de nitroceluloză, nu este potrivită pentru detectarea proteinelor slab exprimate. | Acest lucru este mai potrivit pentru detectarea proteinelor slab exprimate datorită sensibilității sale ridicate. |
| Zgomot de fundal | |
| Acesta are un zgomot de fundal mai mic | Acesta are un zgomot de fundal mai mare. |
| Interacțiuni cu proteine | |
| Moleculele de proteine se leagă de membranele de nitroceluloză prin interacțiuni hidrofobe. | Proteinele se leagă de membranele PVDF prin interacțiuni hidrofobe și dipol. |
| Natura membranei | |
| Nitroceluloza este fragilă și fragilă. Cu toate acestea, sunt disponibile versiuni de nitroceluloză și sunt rezistente. | PVDF este mai durabil și are o rezistență chimică mai mare. |
| Abilitatea de a elimina și reutiliza | |
| Nitroceluloza poate avea dificultăți în dezlipirea și reproșarea fără a pierde semnalul. | PVDF este ideal pentru aplicații de reprobare și secvențiere. |
| Adecvare | |
| Nitroceluloza este ideală pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară mică. | PVDF este mai potrivit pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară mai mare. |
| Alte utilizări | |
| Nitroceluloza poate fi utilizată pentru analiza acidului nucleic și pentru blotarea punctelor/slot. | PVDF poate fi folosit pentru secvențierea proteinelor și sistemele de testare în fază solidă. |
| Cost | |
| Acesta este mai ieftin decât membranele PVDF. | Acesta este mai scump decât membranele de nitroceluloză. |
| Nevoia de udare prealabilă | |
| Membranele de nitroceluloză nu necesită preînmuiere cu metanol | Membranele PVDF necesită preînmuiere cu metanol. |
Rezumat – Nitroceluloză vs PVDF
Membranele de nitroceluloză au fost primele membrane utilizate comercial pentru testarea fluxului lateral. Au o capacitate mare de absorbție a proteinelor. Prin urmare, membranele de nitroceluloză sunt utilizate în western blotting. PVDF este un alt tip de membrană utilizat în western blotting și are, de asemenea, o capacitate mare de absorbție a proteinelor. Ambele tipuri sunt utilizate în western blot pentru analiza proteinelor. Cu toate acestea, membranele PVDF au atribute mai speciale, ceea ce le face mai potrivite decât membranele de nitroceluloză pentru Western blotting. Dar, membranele de nitroceluloză sunt mai potrivite pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară mică, membranele PVDF sunt mai potrivite pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară mare. Aceasta este diferența dintre membranele de nitroceluloză și PVDF.
