Diferența cheie – nitroceluloză față de membrană de nailon
Blotting este o tehnică importantă pentru detectarea unor secvențe specifice de ADN, ARN și proteine din amestecurile lor în biologia moleculară. Se realizează folosind o membrană numită blot. Există diferite tehnici de blotting, cum ar fi blotting de nord, de sud și de vest. Selectarea unei membrane adecvate pentru procesul de blotting trebuie făcută cu atenție pentru a preveni legarea nespecifică și detectările greșite. Nitroceluloza, nailonul și PVDF sunt membrane utilizate în mod obișnuit în tehnicile de blotting. Au caracteristici diferite. Diferența cheie dintre nitroceluloză și membrana de nailon este că membranele de nitroceluloză au un potențial ridicat de imobilizare a proteinelor, în timp ce membranele de nailon au un potențial ridicat de imobilizare a acidului nucleic. Cu toate acestea, ambele tipuri de membrane sunt utilizate frecvent în tehnicile de blotting.
Ce este o membrană de nitroceluloză?
Membrana de nitroceluloză este un filtru de membrană utilizat în mod obișnuit în tehnicile de blotare a acidului nucleic și proteinelor. Are un potențial ridicat de legare la proteine. Prin urmare, membranele de nitroceluloză sunt utilizate pe scară largă în tehnica western blotting. Membranele de nitroceluloză sunt compatibile cu toate tehnicile de hibridizare și prezintă capacități de legare superioare fără interferențe. Membranele de nitroceluloză sunt în mod natural de natură hidrofilă. Ei fac interacțiune hidrofilă cu molecule și le imobilizează eficient pe membrană. Membranele comerciale de nitroceluloză sunt disponibile în două dimensiuni ale porilor: 0,45 și 0,2 µm.
Figura 01: Membrană de nitroceluloză utilizată în western blot
Ce este o membrană de nailon?
Membrana de nailon este un alt tip de membrană comercială utilizată în tehnicile de blotting. Se folosește alternativ cu membrane de nitroceluloză pentru Southern și Northern blotting. Membranele de nailon sunt ideale pentru Southern blotting decât nitroceluloza datorită afinității lor mari pentru legarea de ADN. Datorită mai multor caracteristici unice ale membranelor de nailon, cercetătorii folosesc în mod obișnuit membrane de nailon pentru blotting de sud și de nord în loc de peste membrana de nitroceluloză. Membranele de nailon sunt, de asemenea, recomandate pentru decapare și reprobă, spre deosebire de nitroceluloză.
Figura 02: Membrană de nailon folosită pentru Southern blotting
Care este diferența dintre nitroceluloză și membrană de nailon?
Nitroceluloză față de membrană de nailon |
|
| Membranele de nitroceluloză sunt casante. | Membranele de nailon sunt mai puțin fragile. |
| Manevrare | |
| Sunt greu de manevrat. | Sunt ușor de manevrat. |
| Reprobing | |
| Membranele de nitroceluloză nesuportate sunt greu de testat. | Retonarea este ușoară cu membrane de nailon. |
| Compatibilitate cu diverse condiții de depozitare | |
| Membranele de nitroceluloză au o rezistență mai mică pentru a rezista la diferite condiții de depozitare. | Membranele de nailon răspund mai robust la diferite condiții de depozitare. |
| Utilizați | |
| Udarea prealabilă este necesară. | Udarea prealabilă nu este necesară pentru membranele de nailon. |
| Natură hidrofilă | |
| Membranele de nitroceluloză sunt de natură hidrofile, dar sunt mai puțin hidrofile decât membranele de nailon. | Sunt de natură foarte hidrofilă. |
| Potențial de imobilizare | |
| Membranele de nitroceluloză au afinitate mai mică pentru acizii nucleici. Dar are o mare afinitate pentru proteine. | Membranele de nailon au un potențial ridicat de legare cu acizii nucleici decât membranele de nitroceluloză. |
Rezumat – Nitroceluloză versus membrană de nailon
Membranele de nitroceluloză și nailon sunt foi speciale utilizate în tehnica de blotting pentru a reproduce modelul de benzi pe gel. Ele permit posibilitatea de a detecta o anumită secvență sau o proteină din amestecuri prin imobilizarea acestora pe membrană. Odată ce moleculele sunt imobilizate pe membrană, aceasta poate fi utilizată ca substrat pentru analiza hibridizării cu sonde marcate. Membrana de nitroceluloză este utilizată în mod obișnuit pentru detectarea proteinelor în tehnica Western blotting datorită afinității sale mari de legare cu proteinele. Membranele de nailon sunt adesea folosite pentru blotting de sud și de nord. Aceasta este diferența dintre nitroceluloză și membrana de nailon.
