Diferența cheie – YAC vs M13 Phage Vector
Clonarea ADN este un proces important care permite propagarea unor fragmente importante de ADN ale organismelor. Necesită îmbinarea ADN-ului specific cu ADN-ul vector pentru a crea ADN recombinant care se transformă în organismul gazdă. Un vector este o moleculă de ADN care se comportă ca un vehicul pentru a transporta material genetic străin într-o altă celulă sau organism. Ar trebui să se poată replica în interiorul organismului gazdă și să producă mai multe copii ale ADN-ului recombinant. Există diferite tipuri de vectori utilizați în clonarea ADN-ului. Cromozomul artificial de drojdie (YAC) și vectorul fagic M13 sunt două tipuri printre ele. Diferența cheie dintre YAC și vectorul de fagi M13 este că YAC este un cromozom artificial care se replic în celulele de drojdie, în timp ce vectorul de fagi M13 este un ADN circular monocatenar al bacteriofagului M13 care se replic în celulele E Coli.
Ce este un vector YAC?
YAC este un cromozom construit artificial care are capacitatea de a transporta un segment mare de ADN străin și de a se replica în celulele de drojdie. Are centromer, telomere și secvențe de replicare autonomă esențiale pentru replicare și stabilitate. YAC ar trebui să poarte, de asemenea, un marker sau markeri selectivi și locuri de restricție pentru a-l face un vector de clonare eficient. Secvențe mari de la 1000 kb la 2000 kb pot fi inserate în YAC și transferate în drojdie.
Figura 01: Vector YAC
Ce este M13 Phage Vector?
Bacteriophage M13 este un virus care infectează și se reproduce în E Coli. Genomul bacteriofagului M13 este de dimensiuni mici, aproximativ 6,7 kb. Este un ADN monocatenar, circular și cu sens pozitiv. Acest virus infectează în mod specific bacteriile E Coli prin F pilus. Odată ce intră în ssDNA în bacterie, își sintetizează catena complementară și devine dsDNA sau forma replicativă (RF) a M13. RF se poate comporta ca o plasmidă în organismul gazdă. ADNdb se replică în E Coli și produce ADN ss care poartă noi fagi. Acești noi fagi sunt eliberați continuu din E Coli fără a ucide celula gazdă. Cu toate acestea, infecția încetinește creșterea E Coli. dsDNA poate fi extras din celule bacteriene și utilizat ca vectori în clonarea ADN-ului. Sunt cunoscuți ca vectori fagi M13. Ele pot fi ușor manipulate și utilizate în mod similar vectorilor plasmidi.
Abilitatea inerentă de infectare a acestor fagi M13 servește ca o bună calificare pentru a fi utilizat ca vector în clonarea genelor. Când se dezvoltă M13 într-un vector, mai multe elemente ar trebui încorporate în genomul acestuia. Acestea sunt, o genă pentru proteina represor lac (lac I), regiunea proximală operator a genei lac Z, un promotor lac și un situs de donare multiplu (polilinker). Când dsDNA al M13 este utilizat ca vectori, acesta poate fi tratat ca un vector plasmid. Cu toate acestea, utilizarea ssDNA M13 are avantaje în secvențierea ADN-ului și mutagenezei direcționate.
Deoarece vectorul fagic M13 poartă mai multe situsuri de donare în regiunea lacZ, vectorii recombinați pot fi identificați cu ușurință prin screening-ul coloniei albastre/albe pe plăci de agar care conțin IPTG și X-Gal. Plăcile albastre produse pe plăci nu conțin fagii recombinați. Prin urmare, fagii cu inserții pot fi selectați în scopul clonării.
Figura 02: Bacteriofagul M13
Care este diferența dintre YAC și M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC este un cromozom modificat genetic care are capacitatea de a transporta un segment mare de ADN străin și de a se replica în celulele de drojdie. | Vectorul fagic M13 este un vector viral dezvoltat de bacteriofagul M13 care este folosit pentru a introduce ADN străin în E Coli. |
| Scop | |
| YAC-urile au fost concepute pentru a clona fragmente mari de ADN genomic în drojdie. | Vectorii fagi M13 sunt utilizați pentru a introduce ADN străin în E Coli. |
| Lungime de inserare | |
| YAC-urile pot conține inserții genomice de dimensiunea megabazei (1000 kb – 2000 kb). | Dimensiunea inserturilor este de aproximativ 1.500 bps. |
| Constructii | |
| YAC ADN-ul este greu de purificat intact și necesită o concentrație mare pentru a genera sistemul vectorial YAC. | Apare prin lanțul de electroni fotosintetici ciclic. |
| Stabilitate | |
| YAC este instabil. | M13 fagii pot fi extrași cu ușurință. |
| Mărime | |
| Enzimele sunt molecule mai mari. | M13 fagii sunt stabili decât YAC. |
Rezumat – YAC vs M13 Phage Vector
YAC este un sistem vectorial construit artificial care utilizează o anumită regiune a cromozomului de drojdie pentru a introduce segmente mari de material genetic în celulele de drojdie. Vectorul fag M13 este un sistem vectorial derivat din bacteriofagul M13 care utilizează E coli ca organism gazdă. Aceasta este principala diferență dintre YAC și M13 Phage Vector. Ambele sunt la fel de utile în tehnologia ADN-ului recombinant și în clonarea genelor.
