Diferența cheie – Imunofluorescență vs imunohistochimie
Diagnosticarea bolilor, care utilizează metode biologice moleculare, a devenit un domeniu emergent al tehnologiei de laborator clinic. Include toate testele și metodele pentru a identifica o boală și a înțelege cauza unei boli prin analiza ADN-ului, ARN-ului sau proteinelor exprimate într-un organism. Progresele rapide în diagnosticarea moleculară au permis cercetarea de bază privind bolile transmisibile și netransmisibile. Acestea sunt utilizate pentru a determina modificări ale secvenței sau nivelurilor de expresie în gene sau proteine cruciale implicate în boală. Imunofluorescența (IF) și imunohistochimia (IHC) sunt două astfel de tehnici utilizate pe scară largă în biologia cancerului. IF este un tip de IHC în care o metodă de detectare a fluorescenței este utilizată pentru a analiza anticorpii monoclonali și policlonali, în timp ce IHC utilizează metode chimice pentru a detecta anticorpii monoclonali și policlonali. Aceasta este diferența cheie dintre IF și IHC.
Ce este imunofluorescența (IF)?
Imunofluorescența este o tehnică de detectare în care anticorpii utilizați în test sunt etichetați folosind coloranți fluorescenți sau proteine fluorescente în scopul detectării. Anticorpii secundari marcați pot avea ca rezultat semnale de fundal nedorite; prin urmare, tehnica IF se bazează pe marcarea anticorpului primar în sine în prezent pentru a evita semnalele nedorite în timpul detectării. Prin această tehnică, legarea nespecifică între anticorpul primar și cel secundar este prevenită și este mai rapidă deoarece nu este implicată o etapă secundară de incubare. Calitatea datelor este, de asemenea, îmbunătățită.
Figura 01: Colorare cu imunofluorescență dublă pentru BrdU, NeuN și GFAP
Fluorocromii sau coloranții fluorescenți sunt compuși care pot absorbi radiația, de preferință radiația ultravioletă care este excitată. Când particulele ajung la starea fundamentală din starea excitată, ele emit radiații care sunt captate și detectate de un detector pentru a forma un spectru. Este de mare importanță ca marcajul fluorescent să fie compatibil și stabil pentru reacția particulară și ar trebui să fie conjugat corespunzător cu anticorpul pentru a obține rezultate precise. Unul dintre cei mai folosiți fluorocromi este izotiocianatul de fluoresceină (FITC), care este de culoare verde, cu lungimi de undă maxime de absorbție și emisie de 490 nm, respectiv 520 nm. Rodamina, un alt agent utilizat în IF, este de culoare roșie și are lungimi de undă distincte ale vârfurilor de absorbție și emisie de 553 nm și 627 nm.
Ce este imunohistochimia (IHC)?
IHC este o metodă de testare moleculară practicată pentru a identifica și confirma prezența antigenului în celula țintă. Celula țintă ar putea fi o particulă infecțioasă, un agent patogen microbian sau o celulă tumorală malignă. IHC utilizează anticorpi monoclonali și policlonali pentru a determina prezența antigenelor prezente pe suprafața celulelor celulelor țintă. Tehnica se bazează pe legarea antigen-anticorp. Un marker de detecție este conjugat cu acești anticorpi pentru a detecta prezența sau absența antigenului particular. Acești markeri pot fi markeri chimici, cum ar fi enzime, anticorpi marcați fluorescent sau anticorpi marcați radio.
Figura 02: felie de creier de șoarece colorată prin imunohistochimie
Cea mai populară aplicație a IHC este în biologia celulelor canceroase pentru a identifica prezența tumorilor maligne, dar este folosită și pentru detectarea bolilor infecțioase.
Care sunt asemănările dintre imunofluorescență și imunohistochimie?
- Imunofluorescența și imunohistochimia au loc în condiții in vitro.
- Ambele tehnici se bazează pe antigenul-anticorp
- Ambele sunt tehnici foarte rapide.
- Rezultatele tehnicilor sunt reproductibile.
- Ambele au o calitate îmbunătățită a datelor.
- Aceste tehnici utilizate în diagnosticarea cancerului și a bolilor infecțioase.
Care este diferența dintre imunofluorescență și imunohistochimie?
Imunofluorescență vs imunohistochimie |
|
| IF este o tehnică de detectare în care anticorpii utilizați în test sunt etichetați folosind coloranți fluorescenți sau proteine fluorescente pentru detectare. | IHC este o tehnică de detectare în care anticorpii utilizați în test sunt etichetați folosind substanțe chimice sau elemente radioactive pentru detectare. |
| Precizie | |
| Precizia este mai mare în tehnica IF comparativ cu IHC. | Precizia este mai mică în IHC. |
| specificitate | |
| IF este mai specific. | IHC este mai puțin specific. |
Rezumat – Imunofluorescență vs imunohistochimie
Mecanismele moleculare au adus multe schimbări în domeniul medicinei, dând naștere unor metode avansate de testare moleculară care au adus revoluții în domeniul diagnosticului. Aceste invenții au condus la o identificare și confirmare rapidă și precisă a bolii, permițând astfel administrarea și producerea cu succes a medicamentelor. Aceste tehnici sunt, de asemenea, utilizate în farmacologie pentru a găsi țintele medicamentelor și pentru a confirma proprietățile farmacocinetice ale medicamentului în timpul metabolismului medicamentului. IF și IHC sunt două metode de diagnostic care se bazează pe conceptul de legare a antigenului și a anticorpilor, deși modul de detectare în ambele tehnici diferă. IF folosește principiul fluorescenței pentru a detecta antigenul, iar IHC utilizează conceptul de conjugare chimică pentru a detecta antigenul. Aceasta este diferența dintre IF și IHC.
Descărcați versiunea PDF a imunofluorescenței vs imunohistochimie
Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți utiliza în scopuri offline, conform nota de citare. Vă rugăm să descărcați versiunea PDF aici Diferența dintre imunofluorescență și imunohistochimie.
