Diferența cheie dintre imunofluorescența directă și indirectă este că imunofluorescența directă utilizează un singur anticorp care funcționează împotriva țintei de interes, în timp ce imunofluorescența indirectă folosește doi anticorpi pentru a marca ținta de interes.
Imunofluorescența sau imagistica celulară este o tehnică care este utilizată pentru a marca un antigen țintă specific cu un fluorofor. Aici, fluoroforul este un compus chimic fluorescent care poate reemite lumină la excitarea luminii. Când un fluorofor se leagă de antigenul țintă, acesta permite detectarea moleculei țintă din probă. Pentru a o descrie mai departe, atunci când un antigen se leagă cu un anticorp specific, acesta poate fi conjugat cu fluorofori. Prin urmare, este ușor de detectat prezența antigenului țintă în probă atunci când se observă la microscopul cu fluorescență.
În plus, există două tipuri de imunofluorescență; imunofluorescență directă și indirectă. Diferența dintre imunofluorescența directă și indirectă constă în principal în numărul de anticorpi utilizați și în conjugarea fluoroforului. Adică, în imunofluorescența directă, fluoroforul se conjugă direct cu anticorpul primar, în timp ce în imunofluorescența indirectă, fluoroforul se conjugă cu anticorpul secundar.
Ce este imunofluorescența directă?
Imunofluorescența utilizează anticorpi pentru a detecta antigene țintă specifice. Imunofluorescența directă este unul dintre cele două tipuri de imunofluorescență. În imunofluorescența directă, un singur anticorp (anticorp primar) implică și fluoroforul se conjugă direct cu anticorpul primar. La legarea anticorpului cu antigenul țintă, fluoroforul emite fluorescență care poate fi detectată de un microscop cu fluorescență.
Figura 01: Imunofluorescență directă
Cu toate acestea, imunofluorescența directă este o metodă costisitoare, deoarece anticorpii conjugați primari sunt costisitoare în comparație cu anticorpii secundari. Cu toate acestea, nu implică un pas suplimentar, deci, o tehnică mai scurtă. Mai mult, legăturile nespecifice sunt reduse în imunofluorescență directă. Prin urmare, reactivitatea încrucișată a speciilor este scăzută. Dar în detecție, sensibilitatea imunofluorescenței directe este slabă în comparație cu imunofluorescența indirectă.
Ce este imunofluorescența indirectă?
Imunofluorescența indirectă este al doilea tip de imunofluorescență care implică două tipuri de anticorpi, cum ar fi anticorpii primari și secundari, în marcarea antigenului țintă. În această metodă, fluoroforul se conjugă cu anticorpul secundar. Prin urmare, această tehnică implică un pas suplimentar.
Figura 02: Imunofluorescență
Cu toate acestea, sensibilitatea este mare în această metodă, deoarece mai mulți fluorofori pot fi conjugați cu anticorpi secundari și ușurează detectarea. Mai mult, imunofluorescența indirectă este mai puțin costisitoare datorită faptului că conjugarea anticorpilor secundari este mai puțin costisitoare și mai ușoară. În comparație cu imunofluorescența directă, reactivitatea încrucișată a speciilor este mare în metoda indirectă.
Care sunt asemănările dintre imunofluorescența directă și indirectă?
- Sunt două tipuri de tehnici de imunofluorescență.
- Anticorpii primari și fluoroforul sunt implicați în ambele metode.
- De asemenea, reacția antigen-anticorp are loc în ambele metode.
- În plus, atât imunofluorescența directă, cât și cea indirectă utilizează un microscop cu fluorescență pentru detectarea antigenului.
Care este diferența dintre imunofluorescența directă și indirectă?
Imunofluorescența poate fi directă sau indirectă pe baza conjugării fluoroforului cu anticorpii utilizați. În imunofluorescența directă, fluoroforul se conjugă cu anticorpul primar, care este singurul anticorp care implică această tehnică. Spre deosebire de aceasta, în imunofluorescența indirectă, fluoroforul se conjugă cu anticorpul secundar, care este unul dintre cele două tipuri de anticorpi care implică tehnică. Prin urmare, principala diferență între imunofluorescența directă și indirectă este tipul de anticorp care se conjugă cu fluoroforul.
Următorul infografic oferă o comparație alăturată a diferenței dintre imunofluorescența directă și indirectă.
Rezumat – Imunofluorescență directă vs indirectă
Imunofluorescența este o tehnică care este utilizată pentru a detecta prezența unor antigene specifici într-o probă. Această tehnică folosește anticorpi specifici. Prin urmare, în aceasta, anticorpii se conjugă cu fluorofori pentru a le detecta folosind un microscop fluorescent. În plus, există două tipuri de imunofluorescență și anume imunofluorescența directă și indirectă. Imunofluorescența directă implică un singur anticorp și fluorofor direct conjugat cu acest anticorp. Imunofluorescența indirectă implică doi anticorpi; primar şi secundar şi fluorofor conjugat cu anticorpul secundar. Deoarece mai mulți anticorpi secundari se pot lega cu un anticorp primar și mai mulți fluorofori se pot conjuga cu anticorpi secundari, imunofluorescența indirectă este o metodă mai sensibilă decât metoda directă. În plus, metoda indirectă este mai puțin costisitoare decât metoda directă. Astfel, aceasta este diferența dintre imunofluorescența directă și indirectă.
