Diferența cheie – Gel de stivuire vs Gel de separare
Termenii gel de stivuire și gel de separare sunt folosiți în explicarea tehnicii SDS-PAGE. SDS-PAGE sau electroforeza pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă este o tehnică de laborator care este utilizată pentru a separa moleculele de proteine pe baza greutăților lor moleculare. Teoria din spatele tehnicii este că proteinele cu greutăți moleculare diferite prezintă rate diferite de migrare; moleculele cu greutate moleculară mică migrează mai repede, în timp ce moleculele cu greutate moleculară mare migrează lent. Mediul pentru migrare este un gel. Există două tipuri de geluri denumite gel de stivuire și gel de separare. Diferența cheie dintre gelul de stivuire și gelul de separare este că pH-ul gelului de stivuire este 6,8, în timp ce pH-ul gelului de separare este 8,8.
Ce este gelul de stivuire?
Gelul de stivuire este un gel de poliacrilamidă cu concentrație scăzută care este plasat deasupra unui gel de rezoluție mai concentrat (gel de separare) în tehnica SDS-PAGE. Gelul de stivuire este utilizat pentru a îmbunătăți rezoluția electroforezei. Rezoluția crește din cauza diferenței dintre concentrațiile de gel de stivuire și gel de rezoluție care au un efect asupra proteinelor din probă. Deoarece concentrația de poliacrilamidă în gelul de stivuire este scăzută, dimensiunea porilor este mai mare. Acest lucru ajută și la creșterea separării.
Gelul de stivuire este un gel de poliacrilamidă liber, cu pori mari de aproximativ 7% poliacrilamidă. Acești pori nu acționează ca o barieră considerabilă pentru moleculele mari de proteine. Prin urmare, acest gel afectează ușor mobilitatea acelor proteine. Acest lucru face separarea în funcție de mobilitatea și dimensiunea proteinelor prin concentrarea acestora între două geluri.
Figura 01: Gel de acrilamidă SDS-PAGE
pH-ul gelului de stivuire este 6,8. pH-ul său este acid decât cel al gelului care se rezolvă cu 2 unități de pH. Acest pH implică o putere ionică mai mică, deci o rezistență electrică mai mare. Acest lucru provoacă mobilitatea proteinelor decât alte particule încărcate prezente în gel.
Ce este gelul de separare?
Gelul de separare sau gelul de rezoluție al unei tehnici SDS-PAGE este un gel de poliacrilamidă foarte concentrat, care este plasat deasupra gelului de stivuire slab concentrat. Gelul de separare conține o cantitate mare de poliacrilamidă (10%). pH-ul acestui gel este menținut la pH=8,8, care este un nivel de pH mai mare decât cel al gelului de stivuire.
Figura 02: Un aparat de electroforeză cu gel
Când moleculele de proteine ajung la gelul de separare, migrarea acelor molecule este încetinită, deoarece gelul de separare este un gel de concentrație mare, cu o dimensiune mică a porilor, care poate acționa ca o barieră considerabilă pentru mișcarea moleculelor de proteine.. Această încetinire permite celorl alte proteine migrează lent să ajungă din urmă, rezultând o bandă îngustă și concentrată între cele două geluri.
Care este relația dintre gelul de stivuire și gelul de separare?
Atât tipurile de gel de stivuire, cât și de gel de separare sunt utilizate în același aparat
Care este diferența dintre gelul de stivuire și gelul de separare?
Gel de stivuire vs Gel de separare |
|
| Gelul de stivuire este un gel de poliacrilamidă cu concentrație scăzută, care este plasat deasupra unui gel de rezoluție mai concentrat (gel de separare) în tehnica SDS-PAGE. | Gelul de separare sau gelul de rezoluție al unei tehnici SDS-PAGE este un gel de poliacrilamidă foarte concentrat, care este plasat pe partea superioară a unui gel de stivuire slab concentrat. |
| Destinație de plasare | |
| Gelul de stivuire este plasat pe gelul de rezolvare (separator). | Gelul de separare este plasat pe fundul recipientului folosit pentru electroforeza pe gel. |
| Concentrație | |
| Concentrația de gel de stivuire este mare. | Concentrația gelului de separare este scăzută. |
| Conținut de poliacrilamidă | |
| Gelul de stivuire conține aproximativ 7% poliacrilamidă. | Gelul de separare conține aproximativ 10% poliacrilamidă. |
| pH | |
| pH-ul gelului de stivuire este 6,8. | pH-ul gelului de separare este 8,8. |
| Dimensiunea porilor | |
| În gelul de stivuire sunt prezente pori mari. | În gelul de separare sunt prezente pori de dimensiuni mici. |
| Rezoluție | |
| Gelul de stivuireoferă o rezoluție mai bună. | Gelul de separare oferă o rezoluție slabă. |
Rezumat – Gel de stivuire vs Gel de separare
Gelul de stivuire și gelul de separare sunt două tipuri de geluri de poliacrilamidă folosite pentru a obține o mai bună separare a moleculelor de proteine dintr-o probă dată. Diferența dintre gelul de stivuire și gelul de separare este că pH-ul gelului de stivuire este 6,8, în timp ce pH-ul gelului de separare este 8,8.
