Diferența cheie dintre colorarea Coomassie și cea cu argint este că colorarea cu Coomassie este o tehnică de colorare cu proteine care folosește o colorare albastru strălucitor coomassie, în timp ce colorarea cu așchii este o tehnică de colorare cu proteine care folosește o colorare argintie.
Separarea și identificarea proteinelor sunt pași critici în analiza proteomului. Au nevoie de caracterizarea proteinelor de în altă rezoluție după electroforeza pe gel. Există numeroase tehnici de colorare care includ diferite coloranți, cum ar fi coloranți anionici (coomassie brilliant blue), cationi metalici (imidazol-zinc), coloranți de argint și coloranți fluorescenți, etc. Uneori, pot fi utilizate și sonde radioactive. Alegerea tehnicii de colorare depinde de simplitatea, disponibilitatea echipamentului de imagistică în laborator etc.
Ce este colorarea Coomassie?
Colorarea Coomassie este o tehnică de colorare cu proteine care folosește o colorare albastru strălucitor coomassie. Se numește în general tehnica coomassie blue. Albastrul strălucitor Coomassie este cel mai popular colorant proteic anionic. Această colorare colorează în mod normal aproape toate proteinele cu o bună liniaritate cantitativă la sensibilitate medie. Pata albastru strălucitor Coomassie se leagă nespecific de aproape toate proteinele. Există două variante diferite de colorație Coomassie Brilliant Blue: R-250 și G-250. R-250 oferă timpi de colorare mai scurti, în timp ce G-250 este disponibil în formulări mai sensibile și mai ecologice.
Figura 01: Colorare Coomassie
Coloranții Coomassie sunt foarte populari în studiile de spectrometrie de masă și studiile de identificare a proteinelor. Mai mult decât atât, pata de coomassie bio-sigură este o formulare nepericuloasă de coomassie blue G-250 care este disponibilă în prezent pe piață. Avantajul acestei formulări este că necesită doar apă pentru clătire și decolorare. Colorația coomassie bio-sigură oferă o sensibilitate echivalentă cu cea convențională coomassie blue G-250, dar mai bună decât colorația coomassie R-250. În plus, are un protocol de colorare mai simplu și mai rapid decât Coomassie blue G-250 convențional. Dezavantajul colorării cu albastru coomassie este că este mai puțin sensibilă în comparație cu colorarea cu argint. Colorația cu albastru Coomassie este de aproximativ 50 de ori mai puțin sensibilă decât colorarea cu argint. Cu toate acestea, datorită simplității sale de legare, este preferat în multe studii.
Ce este colorarea cu argint?
Cotația cu argint este o tehnică de colorare cu proteine care folosește o colorare argintie. Colorarea cu argint este utilizată pentru colorarea atât a gelurilor de agaroză, cât și de poliacrilamidă. Colorarea cu argint a proteinei în gelurile de agaroză a fost dezvoltată pentru prima dată în 1973 de Kerenyi și Gallyas. Mai târziu, a fost adaptat pentru proteinele din geluri de poliacrilamidă care sunt utilizate în SDS-PAGE. În prezent, colorarea cu argint este folosită și pentru colorarea ADN-ului sau ARN-ului. Pentru a colora gelurile, gelurile sunt incubate cu soluție de azotat de argint în această metodă. Colorarea cu argint colorează locurile în care sunt prezente proteinele de la maro la negru.
Figura 02: Colorare cu argint
Intensitatea colorării cu argint depinde de structura primară a proteinei. Mai mult, curățenia vaselor folosite și puritatea reactivilor pot influența și calitatea colorării cu argint. Cu toate acestea, dezavantajul colorării cu argint este că nu poate detecta toate proteinele, în special glicoproteinele și proteinele cu grupuri mari modificate atașate de lanțurile lor laterale.
Care sunt asemănările dintre Coomassie și colorarea cu argint?
- Coomassie și colorarea cu argint sunt două tehnici folosite în colorarea proteinelor.
- Pot colora atât proteinele, cât și ADN-ul.
- Ambele tehnici de colorare au dezavantaje.
- Aceste tehnici au pași similari, cum ar fi fixarea, colorarea și decolorarea.
Care este diferența dintre colorarea cu Coomassie și cu argint?
Colorația Coomassie este o tehnică de colorare cu proteine care folosește colorarea albastru strălucitor de coomassie, în timp ce colorarea sliver este o tehnică de colorare cu proteine care folosește colorarea argintie. Astfel, aceasta este diferența cheie dintre Coomassie și colorarea cu argint. În plus, colorarea Coomassie este mai puțin sensibilă decât colorarea cu argint.
Infograficul de mai jos enumeră diferențele dintre Coomassie și colorarea cu argint în formă tabelară pentru comparație una lângă alta.
Rezumat – Coomassie vs colorarea cu argint
Pentru a vizualiza proteinele, poate fi efectuată o reacție chimică de legare a colorantului specifică proteinei sau de producere a culorii. Aceasta se numește colorare cu proteine. Coomassie și colorarea cu argint sunt două tehnici utilizate în colorarea proteinelor. Tehnica de colorare Coomassie folosește pata albastru strălucitor Coomassie, în timp ce colorarea sliver folosește pata argintie. Deci, aceasta este diferența cheie dintre Coomassie și colorarea cu argint.
