Diferență cheie – Primer vs inversare
Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă de amplificare a ADN-ului care este utilizată în aplicațiile de biologie moleculară. Este o tehnică folosită în mod obișnuit care face milioane până la miliarde de copii ale unei secvențe de ADN deosebit de interesate. Este o metodă in vitro realizată în laboratoare. Tehnica PCR este total dependentă de ADN polimeraza produsă comercial numită polimerază Taq. Și, de asemenea, necesită mai multe alte componente și menținerea adecvată a temperaturii. O componentă importantă este amorsele. Primerii sunt secvențe scurte de ADN concepute special pentru secvența de ADN țintă. De obicei, au o lungime de aproximativ 20 de nucleotide. Taq polimeraza catalizează adăugarea de nucleotide în secvența de nucleotide preexistentă. Prin urmare, primerii sunt serviți ca puncte de plecare pentru sinteza noilor catene. Taq polimeraza funcționează numai în direcția 5’ până la 3’, prin urmare sinteza ADN-ului are loc în aceeași direcție 5’ până la 3’. Deoarece ADN-ul este dublu catenar, sunt necesare două tipuri de primeri în PCR. Ele sunt cunoscute ca primer direct și primer invers. Primerii direct și invers sunt denumiți pe baza direcției de alungire a primerului în ADN atunci când are loc sinteza ADN. Primerul direct se alipește cu catena ADN antisens și inițiază sinteza catenei +ve a genei în direcția 5’ până la 3’. Primerul invers se alipește cu catena de sens și inițiază sinteza catenei complementare a catenei codificatoare; care este –ve catena genei în direcția 5’ până la 3’. Aceasta este diferența esențială dintre amorsele directe și inverse.
Ce este un Forward Primer?
Orientarea înainte este sinteza catenei de codificare sau a catetei de sens a unei gene. Taq polimeraza catalizează sinteza unei noi catene în direcția 5’ până la 3’. Sinteza catenei codificatoare are loc atunci când primerul se alipește cu catena necodificatoare sau antisens și se alungește în direcția 5’ până la 3’.
Figura 01: Primere înainte și inversă
Primul care se aliniază cu catena antisens sau cu catena necodifică sau cu catena matriță este cunoscut ca primer direct, deoarece primerul direct acționează ca punct de plecare pentru sinteza catenei codificatoare sau pozitive a genei. Primerul direct are o secvență scurtă de nucleotide care este complementară capătului de flancare 3’ al catenei antisens. Se hibridizează cu catena antisens și facilitează polimeraza Taq să adauge nucleotide care sunt complementare catenei șablon.
Ce este un grund invers?
Primul invers este secvența scurtă de ADN care se aliniază cu capătul 3’ al catenei senzoriale sau al catenei codificatoare. Primerul invers servește ca punct de plecare pentru a sintetiza o catenă complementară a secvenței codificante sau a secvenței necodificatoare. Primerul invers este proiectat complementar capătului 3’ al firului de codificare. Prin urmare, se recoapează cu capătul 3’ flancat al catenei de codificare și permite polimerazei Taq să sintetizeze catena antisens sau catena șablon. Deoarece orientarea sa este inversată, acest primer este etichetat ca primer invers.
Atât primerii inversi, cât și cei directe sunt importanți pentru producerea de milioane până la miliarde de copii ale anumitor regiuni ale ADN-ului care sunt vizate sau interesate.
Care sunt asemănările dintre primer și invers?
- Atât primerii directe, cât și cei inversi sunt fabricați din oligonucleotide.
- Atât primerii directe, cât și cei inversi posedă o secvență scurtă de nucleotide complementară capetelor de flancare ale catenelor duble ADN.
- Atât primerii directe, cât și cei inversi constau de obicei din 20 de nucleotide.
- Atât primerii directe, cât și cei inversi sunt utilizați în reacțiile în lanț a polimerazei.
- Atât amorsele directe, cât și cele inverse sunt sintetizate comercial.
- Atât grundulele directe, cât și cele inverse sunt stabile la temperatură și, în mod normal, au Tm similare.
- Atât primerii directe, cât și cei inversi sunt recoapți cu secvențele de ADN țintă.
- Atât primerul direct, cât și cel invers sunt proiectați în funcție de reacțiile PCR.
- Atât primerii directe, cât și cei inversi sunt serviți ca puncte de plecare pentru amplificarea ADN-ului.
- Atât primerii inversi, cât și cei directe sunt importanți pentru producerea a milioane de copii ale anumitor regiuni ale secvențelor de ADN vizate sau interesate.
Care este diferența dintre grund direct și invers?
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Primerul direct este secvența scurtă de ADN care hibridizează cu capătul 3’ al catenei necodificatoare sau șablon a genei și servește drept punct de plecare pentru a sintetiza secvența codificatoare. | Primerul invers este secvența scurtă de ADN care hibridizează cu capătul 3’ al catenei de codificare sau al catenei non-șablon și servește drept punct de plecare pentru a sintetiza secvența necodificatoare. |
| Suvita de recoacere | |
| Recoace de grund direct cu șablon. | Recoace de grund invers cu firul fără șablon. |
| Noua secvență rezultată | |
| Primerul direct facilitează sinteza secvenței de codificare. | Primerul invers facilitează sinteza secvenței necodificatoare. |
Rezumat – Primer vs inversare
Există două tipuri de primeri implicați în tehnica PCR. Sunt primeri înainte și invers. Pe baza alungirii primerului în sinteza noilor catene de ADN, acești primeri sunt etichetați sau denumiți. Taq polimeraza sintetizează noul ADN în orientare 5’ până la 3’. Prin urmare, primerii sunt concepuți ca complementari capetelor 3’ ale catenelor duble. Primerul direct care se alungește în direcția 5’ până la 3’ hibridizează cu capătul 3’ al antisensului sau al șablonului sau al secvenței necodificatoare. Acesta servește ca punct de plecare pentru a sintetiza secvența de codificare. Primerul invers care se alungește în direcția 5’ până la 3’ hibridizează cu capătul 3’ al codificării sau al non-șablonului sau al catenei de sens. Acesta servește ca punct de plecare pentru a sintetiza secvența necodificatoare. Aceasta este diferența dintre grund direct și invers.
