Diferența cheie – Citometria în flux vs FACS
În contextul teoriei celulare, celulele sunt unitatea structurală și funcțională de bază a tuturor organismelor vii. Sortarea celulelor este o metodologie care este utilizată pentru a separa diferite celule în funcție de caracteristicile fiziologice și morfologice. Ele pot avea caracteristici intracelulare sau extracelulare. Interacțiunea ADN-ului, ARN-ului și proteinelor sunt considerate proprietăți interactive intracelulare, în timp ce forma, dimensiunea și diferitele proteine de suprafață sunt considerate proprietăți extracelulare. În știința modernă, metodologiile de sortare a celulelor au dus la sprijinirea diferitelor investigații în studiile biologice și, de asemenea, la stabilirea de noi principii prin cercetarea medicinei. Sortarea celulelor se desfășoară pe diverse metodologii care includ atât metode primitive cu mai puține echipamente, cât și metodologii tehnologice avansate cu utilizarea de mașini sofisticate. Citometria în flux, sortarea celulelor activate fluorescent (FACS), selecția celulelor magnetice și sortarea celulelor individuale sunt metodologiile majore utilizate. Citometria în flux și FACS sunt dezvoltate pentru a diferenția celulele în funcție de proprietățile lor optice. FACS este un tip specializat de citometrie în flux. Citometria în flux este o metodologie care este utilizată în timpul analizei unei populații eterogene de celule în funcție de diferite molecule de suprafață celulară, dimensiune și volum, care permite investigarea celulelor individuale. FACS este un proces prin care un amestec de probe de celule este sortat în funcție de caracteristicile lor de difuzie a luminii și fluorescență în două sau mai multe containere. Aceasta este diferența cheie dintre citometria în flux și FACS.
Ce este citometria în flux?
Citometria în flux este o metodă care este utilizată pentru a examina și determina expresia moleculelor intracelulare și a suprafeței celulare și pentru a defini și caracteriza tipuri de celule distincte. Este, de asemenea, utilizat pentru a determina volumul și dimensiunea celulei și pentru a evalua puritatea subpopulațiilor care sunt izolate. Acest lucru permite evaluarea multi-parametrică a celulelor individuale aproximativ în același timp. Citometria în flux este utilizată pentru măsurarea intensității fluorescenței care este produsă din cauza anticorpilor marcați fluorescent care ajută la identificarea proteinelor sau liganzilor care se leagă de celulele asociate.
Figura 01: Citometrie în flux
În general, citometria în flux include în principal trei subsisteme. Ele sunt fluidica, electronica și optica. În citometria în flux, sunt disponibile cinci componente principale care sunt utilizate în sortarea celulelor. Acestea sunt, o celulă de flux (un flux de lichid care este utilizat pentru a le transporta și a alinia celulele pentru procesul de detectare optică), un sistem de măsurare (poate fi din diferite sisteme, inclusiv lămpi cu mercur și xenon, răcite cu apă de mare putere sau lasere de putere redusă răcite cu aer sau lasere cu diodă), un ADC; Sistem convertor analog-digital, sistem de amplificare și un computer pentru analiză. Achiziția este procesul prin care datele sunt colectate din probe cu ajutorul citometrului de flux. Acest proces este mediat de un computer care este conectat cu citometrul de flux. Software-ul prezent în computer analizează informațiile furnizate computerului de la citometrul de flux. Software-ul are, de asemenea, capacitatea de a ajusta parametrii experimentului controlând citometrul de flux.
Ce este FACS?
În contextul citometriei în flux, sortarea celulelor activate prin fluorescență (FACS) este o metodă care este utilizată în diferențierea și sortarea unei probe dintr-un amestec de celule biologice. Celulele sunt separate din două sau mai multe containere. Metoda de sortare se bazează pe caracteristicile fizice ale celulei, care includ caracteristicile de împrăștiere a luminii și fluorescența celulei. Aceasta este o tehnică științifică importantă, care poate fi utilizată pentru a obține rezultate cantitative și calitative fiabile ale semnalelor de fluorescență care sunt emise de fiecare celulă. În timpul FACS, inițial, amestecul de celule pre-obținut; o suspensie este îndreptată spre centrul unui curent îngust de lichid care curge rapid. Fluxul de lichid este conceput pentru a separa celulele din suspensie în funcție de diametrul fiecărei celule. Un mecanism de vibrație este aplicat fluxului de suspensie care are ca rezultat formarea de picături individuale.
Figura 02: FACS
Sistemul este calibrat pentru a crea o singură picătură cu o singură celulă. Chiar înainte de formarea picăturilor, suspensia de curgere se deplasează de-a lungul unui aparat de măsurare a fluorescenței care detectează caracteristica fluorescenței fiecărei celule. În punctul de formare a picăturilor, este plasat un inel de încărcare electrică, căruia îi este indusă o sarcină înainte de măsurarea intensității fluorescenței. Odată ce picăturile sunt formate din fluxul de suspensie, o sarcină este prinsă în picături care apoi intră într-un sistem de deviere electrostatică. În funcție de încărcare, sistemul deturnează picăturile în diferite recipiente. Metoda de aplicare a taxei variază în funcție de diferitele sisteme utilizate în FACS. Echipamentul folosit în FACS este cunoscut ca sortator de celule activat prin fluorescență.
Care este asemănarea dintre citometria în flux și FACS?
Citometria în flux și FACS sunt dezvoltate pentru a diferenția celulele în funcție de proprietățile lor optice
Care este diferența dintre citometria în flux și FACS?
Citometrie în flux vs FACS |
|
| Citometria în flux este o metodologie care este utilizată în timpul analizei unei populații eterogene de celule în funcție de diferite molecule de suprafață celulară, dimensiune și volum, care permite investigarea celulelor individuale. | FACS este un proces prin care un amestec de probe de celule este sortat în funcție de caracteristicile lor de difuzie a luminii și fluorescență în două sau mai multe recipiente. |
Rezumat – Citometria în flux vs FACS
Celula este unitatea structurală și funcțională de bază a tuturor organismelor vii. Sortarea celulelor este procesul prin care celulele sunt izolate și diferențiate în diferite categorii pe baza proprietăților lor intracelulare și extracelulare. Citometria în flux și FACS sunt două metodologii importante în sortarea celulelor. Ambele procese sunt dezvoltate pentru a diferenția celulele în funcție de proprietățile lor optice. Citometria în flux este o metodologie care este utilizată în timpul analizei unei populații eterogene de celule în funcție de diferite molecule de suprafață celulară, dimensiune și volum, care permite investigarea celulelor individuale. FACS este un proces prin care un amestec de probe de celule este sortat în funcție de caracteristicile lor de difuzie a luminii și fluorescență în două sau mai multe containere. Aceasta este diferența dintre citometria în flux și FACS.
Descărcați versiunea PDF a citometriei în flux vs FACS
Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți utiliza în scopuri offline, conform nota de citare. Vă rugăm să descărcați versiunea PDF aici Diferența dintre citometria în flux și FACS
