Diferența cheie dintre focalizarea cromatografică și focalizarea izoelectrică este că focalizarea cromatografică este un tip de metodă de cromatografie pe coloană care utilizează rășini schimbătoare de ioni, în timp ce focalizarea izoelectrică este un tip de tehnică de electroforeză care utilizează geluri de gradient de pH imobilizate.
Cromatofocalizarea și focalizarea izoelectrică sunt două tehnici care separă proteinele în funcție de punctele lor izoelectrice. Atât focalizarea cromatografică, cât și focalizarea izoelectrică au o mare putere de rezoluție. Cromatofocalizarea este o metodă de cromatografie pe coloană de în altă rezoluție, în timp ce focalizarea izoelectrică este o metodă de separare electroforetică. În plus, cromatofocalizarea nu utilizează un câmp electric, în timp ce focalizarea izoelectrică are nevoie de un câmp electric.
Ce este Chromatofocusing?
Chromatofocusing este un tip de cromatografie cu eluție mare care separă proteinele în funcție de diferențele dintre punctul lor izoelectric. Utilizează o coloană cu rășină schimbătoare de ioni și un gradient de pH dezvoltat intern. Spre deosebire de focalizarea izoelectrică, focalizarea cromatografică nu implică un câmp electric. Cromatofocalizarea este o tehnică puternică de purificare care poate rezolva molecule foarte asemănătoare chiar și care diferă doar cu 0,02 unități de pH. Prin urmare, cromatofocalizarea este cea mai potrivită ca pas final de lustruire atunci când este necesară o rezoluție în altă pentru separarea componentelor foarte asemănătoare.
În cromatofocalizare, proba este aplicată pe coloană prin amestecarea acesteia cu tamponul de pornire. Proteinele care se află la un pH peste punctul lor izoelectric sunt încărcate negativ și rămân aproape de vârful coloanei, în timp ce alte proteine care se află la pH sub punctul lor izoelectric migrează în jos pe coloană. Proteina cu cel mai mare punct izoelectric este eluată prima în timp ce proteina cu cel mai mic punct izoelectric este eluată ultima din coloană. Această tehnică este afectată de mai mulți factori, cum ar fi precipitarea proteinelor și liniaritatea gradientului de pH.
Ce este focalizarea izoelectrică?
Focalizarea izoelectrică este o tehnică care separă diferite molecule în funcție de punctul lor izoelectric. Este cunoscută și sub denumirea de electrofocalizare. Această tehnică este adesea folosită pentru separarea proteinelor într-un gel. În focalizarea izoelectrică, proba este adăugată în geluri cu gradient de pH imobilizat (IPG). Gelul IPG este o matrice de gel de acrilamidă copolimerizată cu un gradient de pH. Proteinele migrează către catod până găsesc regiunea pH a punctelor izoelectrice. Când o proteină atinge pH-ul care nu are sarcină netă, migrarea încetează și dă o bandă staționară. De asemenea, fiecare proteină dă o bandă într-un punct din gradientul de pH corespunzător punctului său izoelectric.
Figura 01: Focalizare izoelectrică
Focalizarea izoelectrică este primul pas al electroforezei pe gel bidimensionale. În această tehnică, proteinele sunt mai întâi separate în funcție de punctele lor izoelectrice prin focalizare izoelectrică și apoi separate prin greutatea lor moleculară prin SDS-PAGE.
Care sunt asemănările dintre focalizarea cromatografică și focalizarea izoelectrică?
- Cromatofocalizarea și focalizarea izoelectrică sunt două metode de mare rezoluție.
- Ambele se bazează pe punctul izoelectric al proteinelor.
- Aceste tehnici folosesc un gradient de pH.
- Ambele proceduri sunt informative pentru caracterizarea variantelor hemoglobinei umane.
- Ei pot rezolva moleculele în care valorile pI diferă cu doar 0,02 unități de pH.
Care este diferența dintre focalizarea cromato-focalizată și focalizarea izoelectrică?
Chromatofocusing este o tehnică de cromatografie pe coloană de în altă rezoluție care separă proteinele în funcție de punctul lor izoelectric. În schimb, focalizarea izoelectrică este o tehnică electroforetică care separă proteinele în funcție de punctul lor izoelectric prin aplicarea unui câmp electric de-a lungul unui gradient de pH format într-un capilar. Deci, aceasta este diferența cheie dintre focalizarea cromato-focalizată și focalizarea izoelectrică.
O altă diferență între focalizarea cromato-focalizată și focalizarea izoelectrică este că focalizarea cromato-electrică nu implică un câmp electric, în timp ce focalizarea izoelectrică are nevoie de un câmp electric.
Rezumat – Cromatofocalizare vs focalizare izoelectrică
Cromatofocalizarea și focalizarea izoelectrică sunt două tehnici similare care au o capacitate mare de rezoluție a moleculelor, în special a moleculelor foarte asemănătoare. Cromatofocalizarea este o tehnică de cromatografie pe coloană de în altă rezoluție, în timp ce focalizarea izoelectrică este o metodă de electroforeză. Cromatofocalizarea nu implică un câmp electric, spre deosebire de focalizarea izoelectrică. Astfel, aceasta rezumă diferența dintre focalizarea cromatografică și focalizarea izoelectrică.
