Diferența cheie dintre translația poreclei și umplerea finală este că translatarea poreclei este un proces care creează sonde ADN marcate pentru diferite reacții de hibridizare, în timp ce umplerea finală este o tehnică care creează fragmente tocite prin adăugarea de nucleotide în protuberanțe monocatenar.
Translatarea Nick și umplerea finală sunt două tehnici utilizate în biologia moleculară. Translația Nick este utilizată pentru marcarea sondelor pentru hibridizare în scopul de a detecta secvențe de nucleotide specifice. Umplutura de la capăt este folosită pentru a face fragmente tocite care aveau capete lipicioase cu proeminențe monocatenare. Ambele tehnici au o mare importanță și sunt efectuate în mod obișnuit în laboratoarele de cercetare moleculară.
Ce este Nick Translation?
Translatarea Nick este o tehnică importantă utilizată pentru prepararea sondelor marcate pentru diferite tehnici biologice moleculare, cum ar fi blotting, hibridizare in situ, hibridizare fluorescentă in situ etc. Este o metodă in vitro de etichetare a ADN-ului. Sondele ADN sunt utilizate pentru a identifica secvențe specifice de ADN sau ARN. Cu ajutorul unei sonde marcate, fragmente specifice pot fi marcate sau vizualizate dintr-un amestec complex de acid nucleic. Prin urmare, sondele marcate sunt preparate folosind diferite tehnici. Translația Nick este o astfel de metodă care produce sonde marcate cu ajutorul enzimelor ADN-a 1 și ADN-polimeraza 1.
Figura 01: Traducere Nick
Procesul de traducere Nick începe cu activitatea enzimatică ADNază 1. ADNaza 1 introduce spărturi în coloana vertebrală de fosfat a ADN-ului dublu catenar prin scindarea legăturilor fosfodiesterului dintre nucleotide. Odată creată poreca, va fi produsă gruparea 3′ OH liberă a nucleotidei, iar asupra ei va acționa enzima ADN polimeraza 1. Activitatea exonucleazei de la 5′ la 3′ a ADN polimerazei 1 îndepărtează nucleotidele din nick spre direcția 3′ a catenei de ADN.
Simultan, activitatea polimerazei enzimei ADN polimeraza 1 funcționează și adaugă nucleotide pentru a înlocui nucleotidele îndepărtate. Dacă nucleotidele sunt marcate, înlocuirea va avea loc cu nucleotidele marcate și va marca ADN-ul pentru identificare. În cele din urmă, acest ADN marcat nou sintetizat poate fi folosit ca sonde în diferite reacții de hibridizare.
Ce este umplerea finală?
Umplerea finală este o tehnică folosită în biologia moleculară pentru a face fragmente tocite. Digestia de restricție produce fragmente cu proeminențe. Aceste fragmente pot să nu fie compatibile pentru a lega în vectori plasmidici. Vectorii sunt adesea tociți pentru a permite unirea capetelor incompatibile. Prin urmare, fragmentele cu proeminențe pot fi tocite prin adăugarea nucleotidelor la catena complementară folosind proeminența ca șablon pentru polimerizare. Acest proces este cunoscut sub numele de umplere finală.
ADN polimeraze precum fragmentul Klenow de ADN polimeraza I și ADN polimeraza T4 catalizează umplerea finală. Ei adaugă nucleotide pentru a umple (5′ → 3′) și a mesteca înapoi (3′ → 5′). Odată ce capetele lipicioase sunt umplute, acestea devin tocite și sunt gata să se lege într-un vector.
În plus, umplerea finală poate fi folosită pentru a eticheta moleculele de ADN. Cu toate acestea, poate fi folosit doar pentru a marca moleculele de ADN cu capete lipicioase. În comparație cu traducerea poreclei, umplerea finală este o metodă mai blândă, care rareori cauzează rupturi de ADN.
Care sunt asemănările dintre Nick Translation și End Filling?
- Atât traducerea poreclei, cât și umplerea finală sunt tehnici biologice moleculare.
- Pot fi folosite pentru a eticheta sondele.
- Ambele sunt in vitro
Care este diferența dintre Nick Translation și End Filling?
Translatarea Nick este o tehnică care creează sonde etichetate pentru hibridizare. În schimb, umplerea finală este o tehnică care creează fragmente contondente pentru legarea în vectori. Deci, aceasta este diferența cheie dintre traducerea poreclei și completarea finală. În plus, traducerea Nick necesită utilizarea activității exonucleazei de 5’ până la 3′, în timp ce umplerea finală nu necesită activitate de exonuclează de 5’ până la 3′.
Infograficul de mai jos prezintă diferențele dintre traducerea pseudonimului și completarea finalului mai detaliat.
Rezumat – Traducere Nick vs End Filling
Translatarea Nick este o metodă care încorporează nucleotide radiomarcate în ADN. Sintetizează sonde marcate pe baza activităților enzimelor ADNazei 1 și E. coli ADN polimeraza 1. Umplerea finală, pe de altă parte, este o tehnică care produce fragmente contondente. Atunci când fragmentele au capete lipicioase (protocoale monocatenare), este necesar să se facă capete tocite pentru a se liga în vectori. Umplerea finală adaugă nucleotide compatibile și creează fragmente de capăt tocite pentru a le face compatibile pentru ligatură. Astfel, aceasta rezumă diferența dintre traducerea poreclei și completarea finală.
