Diferența cheie – Mersul cromozomilor vs sărituri
Mersul cromozomilor și s altul cromozomilor sunt două instrumente tehnice utilizate în biologia moleculară pentru localizarea genelor pe cromozomi și cartografierea fizică a genomilor. Mersul cromozomilor este o tehnică utilizată pentru a clona o genă țintă într-o bibliotecă genomică prin izolarea și clonarea repetată a clonelor adiacente ale bibliotecii genomice. Săritura cromozomială este o versiune specială a mersului cromozomial care depășește punctele de întrerupere ale mersului cromozomial. Mersul cromozomal poate doar secvenția și maparea unor lungimi mici de cromozomi, în timp ce s altul cromozomial permite secvențierea unor părți mari de cromozomi. Aceasta este diferența cheie dintre mersul cromozomal și săritura cromozomială.
Ce este mersul cromozomului?
Mersul cromozomilor este un instrument care explorează secvențele necunoscute ale secvenței cromozomilor folosind fragmente de restricție suprapuse. În mersul cromozomilor, o parte a unei gene cunoscute este utilizată ca sondă și continuă cu caracterizarea întregii lungimi a cromozomului care urmează să fie mapat sau secvențial. Aceasta merge de la marcator la lungimea țintă. În mersul cromozomilor, capetele fiecărui fragment care se suprapun sunt folosite pentru hibridizare pentru a identifica următoarea secvență.
Sondele sunt preparate din bucățile terminale ale ADN-ului donat și sunt subclonate. Apoi sunt folosite pentru a găsi următorul fragment care se suprapune. Toate aceste secvențe suprapuse sunt folosite pentru a construi harta genetică a cromozomului și a localiza genele țintă. Este o metodă de analiză a porțiunilor lungi de ADN prin fragmente mici suprapuse din biblioteca genomică reconstituită.
Tehnica de mers cu cromozomi – Pași
-
Izolarea unui fragment de ADN care conține gena cunoscută sau markerul în apropierea genei țintă
- Pregătirea hărții de restricție a fragmentului selectat și subclonarea regiunii de capăt a fragmentului pentru a fi folosită ca sondă
- Hibridizarea sondei cu următorul fragment suprapus
- Pregătirea hărții de restricție a fragmentului 1 și subclonarea regiunii de capăt a fragmentului 1 pentru a fi utilizată ca sondă pentru identificarea următorului fragment care se suprapune.
- Hibridizarea sondei cu următorul fragment suprapus 2
- Pregătirea hărții de restricție a fragmentului 2 și subclonarea regiunii de capăt a fragmentului 2 pentru a servi drept sondă pentru identificarea următorului fragment suprapus
Pașii de mai sus trebuie continuați până la gena țintă sau până la 3’ de capăt din lungimea totală a secvenței.
Figura 01: Tehnica de mers cromozomic
Mersul cromozomilor este un aspect important al citogeneticii în găsirea SNP-urilor multor organisme și analiza bolilor transmise genetic și găsirea mutațiilor genelor relevante.
Ce este s altul cromozomului?
Săritura cromozomală este o tehnică folosită în biologia moleculară pentru cartografierea fizică a genomilor organismelor. Această tehnică a fost introdusă pentru a depăși o barieră a mersului cromozomial care a apărut la găsirea regiunilor ADN repetitive în timpul procesului de clonare. Prin urmare, tehnica de sărituri cromozomiale poate fi considerată o versiune specială a mersului cromozomial. Este o metodă rapidă în comparație cu mersul cromozomial și permite ocolirea secvențelor ADN repetitive care nu sunt predispuse să fie clonate în timpul mersului cromozomial. Săritura cromozomală restrânge decalajul dintre gena țintă și markerii cunoscuți disponibili pentru cartografierea genomului.
Instrumentul de s alt cromozomii începe cu tăierea unui ADN specific cu endonucleaze de restricție speciale și legarea fragmentelor în bucle circularizate. Apoi se folosește un primer proiectat dintr-o secvență cunoscută pentru a secvența buclele circularizate. Acest primer permite sărituri și secvențiere într-o manieră alternativă. Prin urmare, poate ocoli secvențele ADN repetitive și poate merge rapid prin cromozom pentru căutarea genei țintă.
Descoperirea genei care codifică boala fibroză chistică a fost făcută folosind instrumentul de sărituri cromozomiale. Combinate împreună, săriturile cromozomiale și mersul pe jos pot îmbunătăți procesul de cartografiere a genomului.
Figura 02: Săritura cromozomală
Care este diferența dintre mersul cromozomilor și săriturile?
Mersul cromozomilor vs sărituri |
|
| Cromozomul este un instrument folosit în biologia moleculară pentru cartografierea genomului și localizarea anumitor gene. | Săritura cromozomilor este un instrument folosit pentru cartografierea fizică a genomurilor și găsirea rapidă a genelor țintă în cromozomi. |
| Lungimi comparative de secvențiere | |
| Numai fragmentele mici pot fi clonate prin mersul cromozomial. | Lungimile mai mari ale cromozomilor pot fi cartografiate prin s altul cromozomial. |
| Clonarea ADN-ului repetitiv în cromozomi | |
| Tehnica de mers pe cromozomi are dificultăți în a parcurge secvențele ADN care se repetă găsite în cromozomi. | Permite ocolirea secvențelor ADN repetitive. Prin urmare, nu există nicio dificultate când le găsiți în timpul secvențierii. |
| factori care afectează procesele | |
| Succesul procesului depinde de dimensiunea genomului și de distanța care trebuie „parcursă” de la o poziție genomică cunoscută până la gena dorită. | Succesul nu depinde de dimensiunea genomului distanței de la marker la țintă. |
| Efectele ADN-ului neclonat | |
| Mersul cromozomal poate fi oprit de fragmente de ADN neclonate. | Cea mai joasă notă pe care o pot juca piccolo este D4. |
| Nevoia unei secvențe cunoscute | |
| Procesul începe cu o genă cunoscută în apropierea țintei. | Procesul necesită un fragment cunoscut pentru proiectarea primerului. |
Rezumat – Mersul cromozomilor vs sărituri
Mersul cromozomal este aplicat frecvent atunci când se știe că o anumită genă este localizată în apropierea unei gene donate anterior într-un cromozom și este posibil să o identifice cu izolarea repetată a clonelor genomice adiacente din biblioteca genomică. Cu toate acestea, atunci când se găsesc regiuni ADN repetitive în timpul tehnicii de mers cromozomial, procesul nu poate fi continuat. Prin urmare, tehnica se rupe din acel punct. Săritura cromozomală este un instrument biologic molecular care depășește această limitare pentru cartografierea genomilor. Ocolește aceste regiuni ADN repetitive care sunt dificil de clonat și ajută la cartografierea fizică a genomului. Aceasta este diferența principală dintre mersul cromozomilor și sărituri.
