Diferența cheie dintre sondele radioactive și cele neradioactive este că sondele radioactive sunt secvențe monocatenar de ADN sau ARN care sunt marcate cu izotopi radioactivi, în timp ce sondele neradioactive sunt secvențe monocatenar de ADN sau ARN care sunt marcate cu o etichetă chimică sau o etichetă fluorescentă.
Hbridizarea acidului nucleic este o tehnică importantă în biologia moleculară, în special în diagnosticul microbian. Ajută la identificarea sau detectarea unei anumite secvențe de acid nucleic. În această tehnică, acizii nucleici sunt fixați pe o suprafață solidă și hibridizați cu o sondă. O sondă este un fragment de ADN sau ARN care este complementar unei secvențe de interes. Dacă secvența țintă este prezentă în probă, sonda se va hibridiza cu aceasta și o va face detectabilă. Există două tipuri de sonde ca sonde radioactive și neradioactive. Prin urmare, putem eticheta sondele cu o etichetă radioactivă sau o etichetă fluorescentă.
Ce sunt sondele radioactive?
Sondele radioactive sunt fragmente de ADN sau ARN monocatenar cu o etichetă radioactivă. Radioizotopii sunt utilizați la prepararea sondelor radioactive. Radioizotopii 32P, 33P și 35S sunt utilizați în mod obișnuit în etichetarea sondelor. În plus, radioizotopii 3H și 1251 sunt, de asemenea, folosiți într-o măsură mai mică în etichetarea sondelor. Dar sunt folosite pentru aplicații specifice. Dintre diferiții radioizotopi, 32P este izotopul cel mai frecvent utilizat în marcarea sondelor radioactive.
Sondele radioactive oferă un grad mai mare de fiabilitate și specificitate. Prin urmare, ele oferă o sensibilitate maximă și permit cuantificarea precisă a secvențelor țintă. Cu toate acestea, există mai multe dezavantaje asociate cu sondele radioactive. Au timpi de înjumătățire scurt. În plus, sunt periculoase, iar producția, utilizarea și eliminarea sunt problematice la manipulare. În plus, pregătirea sondei radioactive este un proces costisitor. Prin urmare, din cauza problemelor de siguranță și a costurilor, sondele radioactive nu sunt folosite ca sonde neradioactive în prezent.
Ce sunt sondele neradioactive?
Sondele neradioactive sunt al doilea tip de sonde care sunt marcate chimic. Digoxigenina este o sondă neradioactivă, care este un marker pe bază de anticorpi. Sondele de digoxigenină sunt specifice și sensibile. Biotina este o altă etichetă utilizată în prepararea sondei neradioactive. Sistemele de detectare a biotină/streptavidină și digoxigenină/anticorpi sunt cele mai frecvent utilizate sonde neradioactive în hibridizare. În plus, sistemul de peroxidază de hrean este un alt sistem de sondă neradioactivă. Odată ce aceste sonde neradioactive sunt hibridizate cu secvențele țintă, ele pot fi detectate prin autoradiografie sau alte tehnici de imagistică.
Figura 01: Hibridarea cu sonde neradioactive
Sondele neradioactive sunt folosite mai des în hibridizarea acidului nucleic decât sondele radioactive. Acest lucru se datorează faptului că sondele neradioactive nu sunt asociate cu materiale periculoase. În plus, metodele de detectare neradioactivă necesită timpi de expunere mai scurti pentru a detecta semnalul de hibridizare. Cu toate acestea, etapele implicate în hibridizarea ADN-ului cu sonde neradioactive sunt de obicei obositoare și consumatoare de timp. În plus, soluțiile disponibile comercial sunt scumpe.
Care sunt asemănările dintre sondele radioactive și cele neradioactive?
- Sondele radioactive și neradioactive sunt două tipuri de sonde utilizate în hibridizarea acidului nucleic.
- Ele facilitează detectarea secvențelor țintă din eșantion.
- Ambele tipuri de sonde sunt la fel de sensibile și specifice.
Care este diferența dintre sondele radioactive și cele neradioactive?
Sondele radioactive sunt secvențele ADN sau ARN monocatenar marcate cu izotopi radioactivi, în timp ce sondele neradioactive sunt secvențe ADN sau ARN monocatenar marcate cu o etichetă chimică. Deci, aceasta este diferența cheie dintre sondele radioactive și cele neradioactive. De asemenea, izotopii radioactivi sunt periculoși. Prin urmare, sondele radioactive sunt considerabil periculoase, în timp ce sondele neradioactive nu sunt periculoase.
În plus, o altă diferență între sondele radioactive și cele neradioactive sunt dezavantajele acestora. Timpul de înjumătățire scurt și pericolele asociate cu producerea, utilizarea și eliminarea acestora sunt dezavantajele utilizării sondelor radioactive. Pe de altă parte, etapele implicate în hibridizarea ADN-ului cu sonde neradioactive sunt de obicei obositoare și consumatoare de timp.
Infograficul de mai jos arată mai multe comparații legate de diferența dintre sondele radioactive și cele neradioactive.
Rezumat – Sonde radioactive vs neradioactive
O sondă este un fragment de ADN sau ARN care conține o secvență de nucleotide care este complementară cu secvența de interes. Pentru a detecta secvența țintă, sondele pot fi marcate radioactiv, fluorescent sau chimic. Sondele se leagă cu secvențe complementare în probă. Sondele radioactive sunt marcate cu izotopi radioactivi, în timp ce sondele neradioactive sunt marcate cu biotină, digoxigenină sau peroxidază de hrean. Astfel, aceasta este diferența cheie dintre sondele radioactive și cele neradioactive.
