Diferența cheie dintre filtrarea pe gel și cromatografia de afinitate este că cromatografia de filtrare pe gel depinde de diferențele de greutate moleculară sau dimensiunea probei de analit, în timp ce cromatografia de afinitate depinde de afinitatea unui analit față de un ligand imobilizat.
Termenul cromatografie în chimia analitică se referă la procesul de separare a componentelor dintr-un amestec folosind diferite tehnici. Cromatografia este un nume colectiv care reprezintă un număr diferit de metode diferite de separare.
Ce este cromatografia cu filtrare cu gel?
Cromatografia de filtrare pe gel este o tehnică analitică în care separarea componentelor depinde de diferența de greutate moleculară sau dimensiune. Această tehnică este cunoscută și sub denumirea de cromatografie cu excludere prin mărime sau cromatografie cu sită moleculară. Tehnica de separare în acest proces depinde de capacitatea diferită a moleculelor din probă de a pătrunde în porii mediului de filtrare pe gel.
În tehnica de filtrare pe gel, faza staționară conține perle de material hidratat, asemănător unui burete, având pori de dimensiuni moleculare care conțin o gamă restrânsă de dimensiuni. Dacă trecem o soluție apoasă constând din molecule de diferite dimensiuni printr-o coloană care conține aceste „site moleculare”, moleculele care sunt mai mari decât porii mediului de filtrare se deplasează rapid prin coloană. În schimb, moleculele mai mici intră în porii gelului și tind să se miște încet prin coloană. Moleculele eluează din coloană în ordinea dimensiunii moleculare descrescătoare. Aici, limita de excludere a gelului este masa moleculară a celor mai mici molecule care nu pot pătrunde în porii unui anumit gel.
Există diferite tipuri de tehnici de filtrare pe gel, cum ar fi metoda de filtrare indirectă pe gel, filtrarea pe gel în stare de echilibru, dializa cu bile de gel etc. Cromatografia de filtrare indirectă pe gel este utilă în determinarea hormonilor tiroidieni liberi. Cromatografia de filtrare pe gel la starea de echilibru este o tehnică indirectă utilă mai ales pentru măsurarea steroizilor liberi, cum ar fi cortizolul, testosteronul etc. Dializa cu bile de gel, pe de altă parte, este o modificare a filtrării pe gel la starea de echilibru, care este comparativ mai simplă.
Ce este cromatografia de afinitate?
Cromatografia de afinitate este o tehnică analitică și o metodă de separare care depinde de o interacțiune specifică de legare între un ligand imobilizat și partenerul său de legare. Unele exemple includ legarea anticorp-antigen, legarea enzimă-substrat și legarea enzimă-inhibitor. Prin urmare, această tehnică are multe aplicații importante în purificarea acidului nucleic, purificarea proteinelor din extracte celulare și purificarea din sânge.
În această tehnică, cea mai importantă proprietate este imobilizarea ligandului. Pentru aceasta putem folosi diverse materiale precum acrilați și silicagel. Este important să se prevină interferența sterică a moleculei țintă la ligand. Mai mult, un inhibitor este atașat la faza solidă. Numim acest inhibitor un distanțier. În mod clasic, un distanțier constă dintr-un lanț de hidrocarburi.
Faza staționară a cromatografiei de afinitate conține miezul, distanțierul și ligandul. Uneori, are și un ion metalic care este cuplat la ligand. Cea mai preferată fază solidă pentru faza staționară în această tehnică este gelul de agaroză, deoarece este ușor de distribuit pentru a umple și împacheta coloana cu paturi de rășină de orice dimensiune și este suficient de mare pentru ca biomoleculele să curgă liber în și prin margele. Liganzii se pot atașa covalent la polimerul granulelor în diferite moduri. Cei mai comuni compuși distanțieri sunt bromura de cianogen, epoxidul, epoxidul cu acid C6 și diamina. Pe de altă parte, ligandul pe care îl putem folosi diferă în funcție de țintă, de exemplu, anticorp-antigen, ioni de fier sau aluminiu-fosfoproteine, avidină-biotină, glutation-GST, proteine chelatoare-His-tagged etc.
Care este diferența dintre filtrarea cu gel și cromatografia de afinitate?
Cromatografia este o tehnică analitică importantă. Cromatografia prin filtrare pe gel și cromatografia de afinitate sunt două variații importante ale cromatografiei. Diferența cheie dintre filtrarea pe gel și cromatografia de afinitate este că cromatografia de filtrare pe gel depinde de diferențele de greutate moleculară sau dimensiunea probei de analit, în timp ce cromatografia de afinitate depinde de afinitatea unui analit față de un ligand imobilizat.
Rezumat – Filtrarea cu gel vs cromatografia de afinitate
Există diferite tipuri de tehnici cromatografice în funcție de aplicarea lor și de natura probei de analit. Filtrarea pe gel și cromatografia de afinitate sunt două astfel de tipuri de tehnici. Diferența cheie dintre filtrarea pe gel și cromatografia de afinitate este că cromatografia de filtrare pe gel depinde de diferențele de greutate moleculară sau dimensiunea probei de analit, în timp ce cromatografia de afinitate depinde de afinitatea unui analit față de un ligand imobilizat.
