Transformare vs Transfectare
Transformarea și transfecția sunt două tehnici simple folosite pentru a introduce o genă străină într-o celulă gazdă. Cu toate acestea, aceste tehnici depind de tipul de sisteme gazdă sau vectoriale.
Ce este transformarea celulară?
Transformarea este tehnica folosită pentru a introduce gene în drojdiile și celulele bacteriene. Această tehnică provoacă de obicei modificări ereditare ale genelor și, prin urmare, expresia genei este permanentă. Transformarea bacteriană a fost introdusă pentru prima dată în 1928 de Frederick Griffith. Apoi, la începutul anilor 1970, această tehnică a fost folosită în E.coli. În timpul procesului de transformare a E. coli, celulele sunt înmuiate în soluție rece ca gheață de CaCl2 Această etapă face celulele E.coli competente. După aceea, celulele competente sunt amestecate cu ADN-ul plasmidic și sunt incubate pe gheață timp de 20-30 min. Apoi se administrează un scurt șoc termic pentru a permite transferul ADN-ului în celulă. În cele din urmă, celulele sunt plasate într-un bulion nutritiv și incubate la 37 °C timp de 60-90 min pentru a stabili plasmidele. Odată ce acești pași sunt finalizați cu succes, celulele transformate pot fi plasate pe un mediu adecvat pentru propagarea celulelor. Deoarece transformarea este considerată o tehnică ineficientă, este posibil să nu fie utilizată pentru pregătirea băncilor de clone.
Ce este transfecția celulară?
Transfecția este o metodă de introducere a unei gene străine, de obicei, în celulele mamiferelor. Există două metode de transfecție; și anume transfecția tranzitorie și transfecția stabilă. În transfecția tranzitorie, expresia genei este disponibilă pentru un timp limitat; astfel, alterarea genei determină expresia temporară. Această metodă de transfecție este simplă și rapidă; prin urmare, poate fi folosit de rutină. Un dezavantaj al transfectării tranzitorii este dificultatea aplicării pentru sisteme de sinteză a proteinelor la scară largă.
În timpul transfecției stabile, o genă țintă este integrată în genomul celulei gazdă și, prin urmare, expresia genei este permanentă, spre deosebire de transfecția tranzitorie.
Care este diferența dintre transformare și transfecție?
• Transformarea este introducerea unei gene într-o celulă procariotă (bacteriană și drojdie), în timp ce transfecția este de obicei numită introducerea unei gene într-o celulă de mamifer.
• Transformarea are ca rezultat o alterare ereditară a genelor, în timp ce transfecția poate duce fie la expresie temporară, fie la modificări permanente ale genelor.
