Diferența cheie dintre testul colorimetric și cel fluorometric este că testul colorimetric determină concentrația compușilor colorați într-o soluție, în timp ce testul fluorometric determină mecanismul cinetic al unei soluții.
Un test biochimic este o tehnică care detectează sau cuantifică activitatea unei molecule biologice sau a unei substanțe analitic. Este un proces in vitro. Testul colorimetric și testul fluorometric sunt două tipuri de teste biochimice comune efectuate în laboratoare. Tehnici multiple precum ELISA și western blotting sunt, de asemenea, teste biochimice complexe pentru cuantificarea activității metabolice și măsurarea comportamentului funcțional al biomoleculelor, cum ar fi proteinele, enzimele și alte molecule mici. Aceste tipuri de teste sunt utilizate pentru identificarea interacțiunilor proteină-ADN, proteină-ARN și proteină-proteină.
Ce este un test colorimetric?
Un test colorimetric este o tehnică care determină concentrația compușilor colorați într-o soluție. Cu alte cuvinte, testul colorimetric este o reacție care duce la o schimbare a culorii datorită unei reacții enzimatice sau chimice între reactivi și analiți. Testele colorimetrice sunt practicate în biochimie pentru a testa enzime, compuși specifici, hormoni, anticorpi și alți analiți. Ei folosesc colorimetre sau spectrofotometre. Colorimetrele sunt instrumente care caracterizează mostrele colorate pentru a oferi o măsură obiectivă a caracteristicilor culorii. Un spectrofotometru este un dispozitiv care măsoară intensitatea luminii în funcție de culoarea sau lungimea de undă a luminii.
Figura 01: Test colorimetric
Cum funcționează un test colorimetric?
Într-un test colorimetric, o placă este preparată cu un anumit anticorp legat de godeuri. Apoi se adaugă proba. Acest lucru poate permite probei să se lege de anticorp. Apoi se adaugă un anticorp de detecție și un substrat la godeuri pentru a reacționa cu sonda de detecție. Soluția stop este adăugată la sfârșit înainte de citire. Un godeu gol numit martor este lăsat fără probă. În testul colorimetric, cu cât culoarea este mai închisă, cu atât concentrația analitului este mai mare. De obicei, este necesară o singură lungime de undă pentru a efectua citirea. Dar dacă există o măsurătoare de referință, sunt utilizate două sau mai multe lungimi de undă.
Ce este un test fluorometric?
Testul fluorometric este o tehnică care determină mecanismul cinetic al reacțiilor enzimatice. Un test fluorometric are loc cu formarea unui produs fluorescent dintr-un substrat nefluorescent sau invers. Acest test folosește, de asemenea, transferul de energie prin rezonanță fluorescentă (FRET) unde, reacția enzimatică schimbă poziția a doi fluorofori în substrat, modificând astfel intensitatea fluorescenței.
Figura 02: Test fluorometric
Testele fluorometrice sunt în general mult mai sensibile decât alte teste. Estimările enzimelor de diagnostic în probele de țesut, celule sau fluide ale pacienților cresc datorită sensibilității sale mai mari.
Cum funcționează un test fluorometric?
Într-un test fluorometric, se adaugă un substrat la proba din placă, iar răspunsul de fluorescență este luat folosind cititorul de plăci. Aici, fiecare celulă este măsurată separat. Plăcile opace sunt utilizate în testele fluorometrice. Acest lucru reduce împrăștierea luminii. Două lungimi de undă sunt necesare pentru acest tip de analiză. O lungime de undă este pentru a detecta excitația, iar ceal altă lungime de undă este pentru emisie.
Care sunt asemănările dintre testul colorimetric și cel fluorometric?
- Testul colorimetric și testul fluorometric sunt două tipuri de teste biochimice.
- Ambele teste sunt efectuate pentru diagnosticare medicală.
- Aceste teste implică o reacție enzimatică.
- Ambele teste implică un substrat și analiți.
Care este diferența dintre testul colorimetric și cel fluorometric?
Un test colorimetric este o tehnică care determină concentrația de compuși colorați într-o soluție, în timp ce testul fluorometric este o tehnică care determină mecanismul cinetic al reacțiilor enzimatice. Deci, aceasta este diferența cheie dintre testul colorimetric și cel fluorometric. Mai mult, testele fluorometrice sunt mai sensibile decât testele colorimetrice; astfel, testele fluorometrice au capacitatea de a detecta mai mulți analiți. Astfel, aceasta este o altă diferență importantă între testul colorimetric și cel fluorometric. În plus, testele fluorometrice necesită două lungimi de undă, în timp ce testele colorimetrice sunt efectuate cu o lungime de undă.
Infograficul de mai jos prezintă mai multe diferențe între testul colorimetric și cel fluorometric.
Rezumat – Test colorimetric versus fluorometric
Un test biochimic este un proces analitic utilizat pentru a determina și a cuantifica reacțiile metabolice celulare. Testul colorimetric și testul fluorometric sunt două tipuri de teste biochimice. Testul colorimetric este o reacție care duce la o schimbare a culorii datorită unei reacții enzimatice sau chimice între reactivi și analiți, în timp ce testul fluorometric este o tehnică care este utilizată pentru a determina mecanismul cinetic al reacțiilor enzimatice. Ambele teste depind de o reacție enzimatică care implică un substrat și un analit. Testele fluorometrice sunt mai sensibile decât testele colorimetrice. Cel mai important, testele fluorometrice necesită două lungimi de undă, în timp ce testele colorimetrice pot fi efectuate cu o singură lungime de undă. Astfel, aceasta rezumă diferența dintre testul colorimetric și cel fluorometric.
