Diferența cheie dintre testul cu micronucleu și cel cu cometă este că testul cu micronucleu este important pentru a verifica deteriorarea cromozomială ca urmare a expunerii la mutagen, în timp ce testul cu cometă este important pentru a detecta deteriorarea primară a ADN-ului în celule individuale.
Testele de genotoxicitate ajută la evaluarea posibilităților de mutații și anomalii cromozomiale. Genotoxinele includ substanțe chimice și radiații. Agenții cancerigeni, mutageni și teratogene sunt principalele categorii de genotoxine. Ele provoacă diverse daune, cum ar fi mutații punctuale, deleții, rupturi simple și duble, aberații cromozomiale, formațiuni de micronuclei, repararea ADN-ului și interacțiunile ciclului celular. Astfel de condiții pot duce la o mare varietate de boli, iar testele de genotoxicitate previn deteriorarea potențială a acestor afecțiuni. Analiza micronucleului și analiza cometei sunt două tehnici în cadrul testelor de genotoxicitate.
Ce este analiza micronucleului?
Testul cu micronucleu este un test pentru a evalua leziunile cromozomiale ca urmare a expunerii la mutagen. Este important în examinarea substanțelor chimice care provoacă formarea fusului și micronuclei. Un test de micronucleu oferă informații despre stabilitatea substanțelor chimice atunci când interferează cu structura și funcția cromozomilor. Mulți agenți cancerigeni sunt pozitivi în testele de micronucleu. Procesul de testare implică un tratament chimic și măsurarea frecvenței celulelor micronucleate. Dacă există o creștere anormală a numărului de celule de micronuclei, se ajunge la concluzia că substanța chimică induce leziuni cromozomiale.
Un test de micronucleu este de obicei efectuat pe celulele care se divizează activ. Prin urmare, eritrocitele și celulele stem din măduva osoasă produse prin diviziuni celulare sunt candidații ideali pentru astfel de teste. Aceștia experimentează o schimbare constantă și rapidă. Deoarece eritrocitele nu au nuclee adevărate, celulele micronucleate sunt mai vizibile la sfârșitul testului.
Figura 01: Observarea testului de micronucleu
Testele cu micronucleu sunt economice, mai rapide, convenabile și necesită mai puține abilități pentru a fi efectuate. Ele reflectă rapid aberațiile cromozomiale într-o manieră fiabilă și sunt extrem de utile pentru a evalua rapid leziunile cromozomiale. Un tip special și versatil de analiză a micronucleului este testul CBMNcyt (cytokinesis block micronucleus cytome). Este testul de preferat pentru a măsura deteriorarea cromozomială și instabilitatea celulelor. Cu toate acestea, principala problemă a utilizării testului de micronucleu este că nu poate determina diferite tipuri de aberații cromozomiale, iar testul are o influență asupra ratei mitotice și proporției morții celulare, determinând modificarea rezultatelor.
Ce este testul cometei?
Testul cometei, care este cunoscut și sub denumirea de test de electroforeză cu un singur gel, este o tehnică simplă și sensibilă pentru a detecta deteriorarea ADN-ului. Măsoară rupturile ADN din celulele eucariote și este o tehnică standard pentru biomonitorizare și testare a genotoxicității.
Testul cometei este implicat în încapsularea celulelor în suspensii de agaroză cu punct de topire scăzut, liza celulelor în condiții neutre sau alcaline și electroforeza celulelor lizate suspendate. În timpul procesului de încapsulare, celulele sunt suspendate în agaroză topită cu punct de topire scăzut, iar agaroza formează o matrice de fibre de carbohidrați pentru a le ancora pe loc. Agaroza este neutră din punct de vedere osmotic; prin urmare, permite soluțiilor să pătrundă prin gel și să afecteze celulele fără a le deranja și muta. Soluția de liză este o soluție apoasă de sare foarte concentrată și un detergent. Această sare perturbă proteinele și modelele de legare în interiorul celulei în timp ce perturbă conținutul de ARN al celulei. Celulele distrug și toate proteinele, ARN-ul, constituenții citoplasmatici și nucleoplasmatici, perturbă și difuzează în matricea de agaroză, lăsând ADN-ul.
Figura 02: Analiza cometei
Soluția de electroforeză este o soluție alcalină în care spirala dublă a ADN-ului se denaturează, iar nucleoidul devine monocatenar. În timpul acestui proces, se aplică un câmp electric pentru a analiza imaginile. Analiza imaginii măsoară intensitatea generală a fluorescenței pentru ADN și nucleoid și le compară pe cele două. Structura generală seamănă cu o cometă cu un cap circular corespunzător ADN-ului nedeteriorat rămas și o coadă pentru ADN-ul deteriorat. Cu cât coada este mai strălucitoare și mai lungă datorită semnalelor mai puternice, cu atât nivelul de deteriorare este mai mare.
Care sunt asemănările dintre testul de micronucleu și de cometă?
- Micronucleul și analiza cometei sunt economice, mai rapide, convenabile și necesită mai puține abilități.
- Acestea sunt efectuate în principal pe ADN.
- Ambele teste ajută la evaluarea mutațiilor și a anomaliilor cromozomiale.
- În plus, ambele tehnici folosesc substanțe chimice pentru a efectua procedura.
Care este diferența dintre testarea micronucleului și a cometei?
Testul micronucleului este important în verificarea leziunilor cromozomiale ca urmare a expunerii la mutagen, în timp ce testul cu cometă este important în detectarea leziunilor primare ADN-ului în celulele individuale. Astfel, aceasta este diferența cheie dintre analiza micronucleului și a cometei. De asemenea, testul micronucleului este bine stabilit pentru a detecta clastogenitatea și aneugenitatea. Testul cometei este folosit ca test de genotoxicitate pentru a detecta deteriorarea primară a ADN-ului în celule. Mai mult, un test de micronucleu oferă informații despre stabilitatea substanțelor chimice, în timp ce un test de cometă este o electroforeză pe gel cu o singură celulă.
Infograficul de mai jos prezintă diferențele dintre analiza micronucleului și a cometei în formă tabelară pentru comparare una lângă alta.
Rezumat – Analiza micronucleu vs cometă
Testele de genotoxicitate ajută la evaluarea posibilităților de mutații și anomalii cromozomiale. Analiza micronucleului și analiza cometei sunt două tehnici în cadrul testelor de genotoxicitate. Testul de micronucleu evaluează leziunile cromozomiale ca o consecință a expunerii la mutagen. Testul cometei este o tehnică simplă și sensibilă pentru a detecta deteriorarea ADN-ului. Deci, aceasta este diferența cheie dintre testul micronucleu și al cometei. Testul micronucleului este important în screening-ul pentru substanțele chimice care provoacă formarea fusului și micronuclei. Testul cometelor este implicat în încapsularea celulelor în suspensii de agaroză cu punct de topire scăzut, liza celulelor în condiții neutre sau alcaline și electroforeza celulelor lizate suspendate.
